室溫培育30min后加入細(xì)胞孔板中,，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng),。2)單克隆細(xì)胞篩選轉(zhuǎn)染24h后胰酶消化細(xì)胞并按1∶6比例接種到新6孔板中,，同時(shí)加入實(shí)驗(yàn)確定的濃度G418,，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細(xì)胞抗性克隆的出現(xiàn),。分別挑選單一抗性克隆至96孔板,，待其逐漸增殖后轉(zhuǎn)入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng),。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時(shí)用LuciferaseAs-sayAystem檢測熒光素酶活性,。檢測時(shí),，各克隆按1×105個(gè)/孔接種到24孔板,，24h后細(xì)胞裂解液裂解12000rpm，4℃離心10min,，收集裂解物,，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物,，停留2s后,，取10s的熒光值（RLU），每個(gè)克隆設(shè)3個(gè)復(fù)孔,，保留RLU值高的細(xì)胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng),，再過5代后進(jìn)行熒光素酶活性檢測。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代,，熒光素酶活性更高的幾個(gè)克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細(xì)胞克隆的熒光值檢測7-luc陽性克隆細(xì)胞按細(xì)胞數(shù)將篩出的MCF-4×104,、2×104、1×104,、5000,、2500、1250,、625,、312和156分別接種到96孔黑板中，另外一組只有細(xì)胞,，一組只有培養(yǎng)基作對照,，設(shè)置2個(gè)復(fù)孔，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次,。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣,？上海體外研究D-熒光素鉀鹽公司

    并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,，現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法,。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo)，這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力，尤其是在高通量應(yīng)用中,。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺的誕生,，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,，還可以檢測底物（luciferin）濃度的變化,。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián)，能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測,，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶,。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立，一種改進(jìn)的luciferin面世,，能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測應(yīng)用,。這種新的底物——fluoroluciferin，是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶,。徐州熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽活題成像做D-熒光素鉀鹽測試真的靠譜嗎,？

    而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種,，而叩甲總科（包括螢火蟲,、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）,。熒光素酶報(bào)告基因（Luc）是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin,，在luciferin氧化的過程中,，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。熒光素酶是能夠催化不同底物氧化發(fā)光的一類酶,，哺乳細(xì)胞無內(nèi)源性熒光素酶,。更常用的熒光素酶有細(xì)菌熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和Renilla熒光素酶,。細(xì)菌熒光素酶對熱敏感,，因此在哺乳細(xì)胞的應(yīng)用中受到限制。螢火蟲熒光素酶靈敏度高,，檢測線性范圍寬達(dá)7～8個(gè)數(shù)量級，是更常用于哺乳細(xì)胞的報(bào)道基因,，用熒光比色計(jì)即可檢測酶活性,，因而適用于高通量篩選。隨著具有膜通透性和光裂解作用的螢火蟲熒光素酶的應(yīng)用,，無需裂解細(xì)胞即可檢測酶活性,。Renilla熒光素酶催化腸腔（coelenterazine）氧化，產(chǎn)物可透過生物膜,，可能是更適用于活細(xì)胞的報(bào)告分子,。將熒光素酶報(bào)告基因載體轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。

    普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,，尤其是體內(nèi)活ti成像技術(shù),。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光,。當(dāng)熒光素過量時(shí),，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。螢光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,，螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期,，這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺,。1991年，Promega發(fā)布了di一代螢光素酶分析產(chǎn)品,，并啟動(dòng)了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計(jì)劃,，通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月，Promega初次提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報(bào)告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性,。當(dāng)時(shí)的人們認(rèn)為,，螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡單的檢測流程等特點(diǎn),，可能會對分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響,。幾個(gè)月后，di一代螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因載體和檢測試劑在Promega誕生,，使這項(xiàng)新技術(shù)正式并更范圍廣地為全球研究人員服務(wù),。D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長是多長？

    短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),，混勻。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。作者：思存鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處,。高斯熒光素酶近年來,，其他熒光素酶（例如高斯熒光素酶）的使用有所增加，因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,，并且不需要ATP的存在,。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì)，可通過氧氣催化腔腸素氧化,，產(chǎn)生光,。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（#AAT-12530）使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性,。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),，產(chǎn)sheng發(fā)光產(chǎn)物，該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光,。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測定試劑盒特點(diǎn)：提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度,。D-熒光素鉀鹽檢測公司招代理嗎？徐州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽使用說明

光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性,。上海體外研究D-熒光素鉀鹽公司

    通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動(dòng)力學(xué),，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測,。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理,，并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,，現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法,。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo)，這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力,，尤其是在高通量應(yīng)用中,。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺的誕生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測系統(tǒng),。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,，還可以檢測底物（luciferin）濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),，能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測,，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,，一種改進(jìn)的luciferin面世,，能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin,。上海體外研究D-熒光素鉀鹽公司

南京翌科生物科技有限公司總部位于仙林街道緯地路9號江蘇生命科技園F7棟301-3室,，是一家翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),，建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,，包括外泌體提取與檢測試劑、非編碼 RNA 提取與檢測試劑,、轉(zhuǎn)染試劑,、microRNA 表達(dá)文庫、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子,、細(xì)胞,、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國產(chǎn)試劑自主研發(fā),，服務(wù)全國各級高校,、研究所、醫(yī)院,、第三方檢測機(jī)構(gòu),、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的公司,。翌科生物作為翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),，建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,，包括外泌體提取與檢測試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測試劑、轉(zhuǎn)染試劑,、microRNA 表達(dá)文庫,、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子、細(xì)胞,、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù),。公司堅(jiān)持國產(chǎn)試劑自主研發(fā)，服務(wù)全國各級高校,、研究所,、醫(yī)院、第三方檢測機(jī)構(gòu),、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶,。的企業(yè)之一，為客戶提供良好的外泌體提取,，非編碼RNA試劑,，檢測試劑，轉(zhuǎn)染試劑,。翌科生物不斷開拓創(chuàng)新,，追求出色,，以技術(shù)為先導(dǎo)，以產(chǎn)品為平臺,，以應(yīng)用為重點(diǎn),，以服務(wù)為保證，不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值,，提供更優(yōu)服務(wù),。翌科生物始終關(guān)注自身，在風(fēng)云變化的時(shí)代,，對自身的建設(shè)毫不懈怠,，高度的專注與執(zhí)著使翌科生物在行業(yè)的從容而自信。