注意事項1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin),、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號115144-35-9為準(zhǔn),。2)注射方式,、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間,。3)如果要進行ATP的檢測,盡量避免外源ATP的污染,,如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,,在進行熒光素的溶解時應(yīng)使用ATP-free無菌水。4)為避免反復(fù)凍融,,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化,如有條件,,可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存,。5)對于檢測靈敏度要求特別高的實驗,建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品,。6)在進行D-熒光素鉀鹽的溶解時,,應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性,,此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響,,從而影響檢測。7)為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作。8)本產(chǎn)品只作科研用途,!D-熒光素鉀鹽如何選擇合作公司,?d熒光素鈉鹽
包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析,;高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽),。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO,;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,,溶劑無毒性,,特別適合體內(nèi)實驗,。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別,。產(chǎn)品性質(zhì)運輸和保存運輸條件:4℃冰袋運輸,;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),,混勻,。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,,然后進行圖像分析,。2.活題成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,,混勻,。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。3)腹腔注射(.),。鹽城螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光,。
可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達(dá)。熒光素酶報告基因有許多優(yōu)點:①非放射性,;②比CAT及其他報告基因速度快,;③比CAT靈敏100倍;④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時,,在植物中的半衰期為3.5小時,。由于半衰期短,故啟動子的改變會即時導(dǎo)致熒光素酶活性的改變,,而熒光素酶不會積累,。相反,CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時,。熒光素酶濃度在10—16mol/L(10pS/L)到10-8mol/L(1mg/L)范圍內(nèi),,熒光信號強度與酶濃度成正比。在理想條件下,,可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶,。檢測步驟:1.用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點,。2.設(shè)計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段,將此片段插入到熒光素酶報告基因質(zhì)粒(pGL3-basic)中,。3.篩選陽性克隆,,測序。擴增克隆并提純質(zhì)粒備用,。4.?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒,,提純備用。同時準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對照,,提純備用,。5.培養(yǎng)293(或其它目的細(xì)胞),并接種于24孔板中,,生長10-24小時(80%匯合度),。6.將報告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。7.提取蛋白并用于熒光素酶檢測,。8.加入底物,,測定熒光素酶的活性。9.計算相對熒光強度,,并與空載對照比較,。
而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種,,而叩甲總科(包括螢火蟲,、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲)則有更多,因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyralis),。熒光素酶報告基因(Luc)是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin,,在luciferin氧化的過程中,,會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。熒光素酶是能夠催化不同底物氧化發(fā)光的一類酶,,哺乳細(xì)胞無內(nèi)源性熒光素酶。更常用的熒光素酶有細(xì)菌熒光素酶,、螢火蟲熒光素酶和Renilla熒光素酶,。細(xì)菌熒光素酶對熱敏感,因此在哺乳細(xì)胞的應(yīng)用中受到限制,。螢火蟲熒光素酶靈敏度高,,檢測線性范圍寬達(dá)7~8個數(shù)量級,是更常用于哺乳細(xì)胞的報道基因,,用熒光比色計即可檢測酶活性,,因而適用于高通量篩選,。隨著具有膜通透性和光裂解作用的螢火蟲熒光素酶的應(yīng)用,無需裂解細(xì)胞即可檢測酶活性,。Renilla熒光素酶催化腸腔(coelenterazine)氧化,,產(chǎn)物可透過生物膜,可能是更適用于活細(xì)胞的報告分子,。將熒光素酶報告基因載體轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,。D-熒光素鉀鹽測試比較好的公司有哪幾個?
我們將與LgBiT具有極強親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時,,可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型,。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物,。由此產(chǎn)生的平臺(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法,。螢光素酶(英語:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP),。沒有螢光素酶的情況下,,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似),。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光,。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,,只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M,。螢光素或螢光素酶不是特定的分子,。南京地區(qū)有哪些做D-熒光素鉀鹽測試的公司。無錫螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽生物公司
D-熒光素鉀鹽熒光素酶和ATP水平分析,。d熒光素鈉鹽
重組為一個明亮的螢光素酶,。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,從而可以進行蛋白質(zhì)相互作用的測定,;也可以和HiBiT一樣高,,從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,,我們將與LgBiT具有極強親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時,,可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型,。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物,。由此產(chǎn)生的平臺(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法,。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP),。沒有熒光素酶的情況下,,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似),。熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸。d熒光素鈉鹽
南京翌科生物科技有限公司總部位于仙林街道緯地路9號江蘇生命科技園F7棟301-3室,,是一家翌科生物基于團隊十余年的研發(fā)基礎(chǔ),,建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,,包括外泌體提取與檢測試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測試劑、轉(zhuǎn)染試劑,、microRNA 表達(dá)文庫,、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子、細(xì)胞,、動物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù),。公司堅持國產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國各級高校,、研究所,、醫(yī)院、第三方檢測機構(gòu),、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶,。的公司。公司自創(chuàng)立以來,,投身于外泌體提取,非編碼RNA試劑,,檢測試劑,,轉(zhuǎn)染試劑,,是商務(wù)服務(wù)的主力軍。翌科生物始終以本分踏實的精神和必勝的信念,,影響并帶動團隊取得成功,。翌科生物始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)行業(yè)。滿足市場需求,,提高產(chǎn)品價值,,是我們前行的力量。