熒光素也就是FDAFDA可透過(guò)細(xì)胞膜并作為熒光素積蓄在活細(xì)胞內(nèi),。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低,，因此熒光素從細(xì)胞中滲漏的量也高,。FDA也可用于流式細(xì)胞儀,。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為488nm和530nm,。熒光素酶（英文名稱(chēng)：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱(chēng),，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的熒光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,，熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）,。沒(méi)有熒光素酶的情況下,，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢，而鈣離子的存在常?？梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）,。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光,。與之形成鮮明對(duì)比的是人類(lèi)使用的白熾燈,，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi),。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,，而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱(chēng)，雖然它們各不相同,。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng),。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽比較靠譜。無(wú)錫熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽試劑

    海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報(bào)告檢測(cè),。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定Amplite?Renilla螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒提供了一種快速,，靈敏的方法，可以使用專(zhuān)有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測(cè)中檢海腎螢光素酶的活性,，與海腎螢光素酶相互作用后,，該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒特點(diǎn)：該測(cè)定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測(cè)量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個(gè)試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測(cè)所必不可少的組分,。熒光素酶是生物體內(nèi)催化熒光素等物質(zhì)氧化發(fā)光的一類(lèi)酶的總稱(chēng),。自然界中，不同的發(fā)光生物擁有不同的熒光素酶,，除了螢火蟲(chóng)熒光素酶（FireflyLuciferase）之外,，還有發(fā)光細(xì)菌體內(nèi)的細(xì)菌熒光素酶、發(fā)光海星的海星熒光素酶等,。目前,，人們對(duì)螢火蟲(chóng)熒光素酶的研究**多、應(yīng)用***,。一則關(guān)于手機(jī)上的細(xì)菌的新聞里,，**在用ATP熒光檢測(cè)儀檢測(cè)手機(jī)表面的細(xì)菌。ATP是一種在動(dòng)物,、植物和細(xì)菌等活細(xì)胞中都存在的能量物質(zhì),，由前述的反應(yīng)式可知，ATP與熒光素,、熒光素酶反應(yīng)發(fā)出熒光,。檢測(cè)樣品中的微生物越多,，ATP就越多，熒光反應(yīng)的光亮就越大,。常州專(zhuān)業(yè)做D-熒光素鉀鹽活題成像D-熒光素鉀鹽測(cè)試比較好的公司有哪幾個(gè),？

    并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè)。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,，現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法,。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo)，這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,，尤其是在高通量應(yīng)用中,。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測(cè)系統(tǒng),。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲(chóng)螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,，還可以檢測(cè)底物（luciferin）濃度的變化。通過(guò)將luciferin與可被不同酶類(lèi)識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),，能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲(chóng)螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,，一種改進(jìn)的luciferin面世,，能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin,，是新型底物開(kāi)發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開(kāi)發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn)，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因,，即NanoLuc?螢光素酶,。

    請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8）本產(chǎn)品只作科研用途,！D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物,，存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下,，D-熒光素鉀被氧化,，產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm)，當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí),，產(chǎn)生的Chemicalbook光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān),。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、哺乳動(dòng)物細(xì)胞的常用報(bào)告基因,。由于沒(méi)有背景干擾,，因此可以很容易地檢測(cè)出低至。用途D-熒光素鉀鹽是一類(lèi)在生物體中發(fā)現(xiàn)的能引起生物發(fā)光的雜環(huán)化合物,，如螢火蟲(chóng),。在ATP存在下,，螢光素酶將其氧化脫羧后會(huì)發(fā)光?；瘜W(xué)研究中可用于熒光素酶的基板,。生物活性D-Luciferin是螢火蟲(chóng)熒光素酶的底物,。體外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.體內(nèi)研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS,。D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司。

注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲(chóng)熒光素（beetleluciferin）,、螢光素鉀鹽只是不同別名,，以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2）注射方式,、動(dòng)物類(lèi)型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間,。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水,。4）為避免反復(fù)凍融，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化,，如有條件，可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊４妗?）對(duì)于檢測(cè)靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn),，建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品,。6）在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí)，應(yīng)使用無(wú)鈣鎂離子的DPBS,，因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性,，此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響，從而影響檢測(cè),。7）為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8）本產(chǎn)品只作科研用途,！D-熒光素鉀鹽的配置是什么,？熒光 劑

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    可用熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)靈敏方便地測(cè)定熒光素酶基因的表達(dá),。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn)：①非放射性,；②比CAT及其他報(bào)告基因速度快；③比CAT靈敏100倍,；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí),，在植物中的半衰期為3．5小時(shí),。由于半衰期短，故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變,，而熒光素酶不會(huì)積累,。相反，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí),。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi),，熒光信號(hào)強(qiáng)度與酶濃度成正比。在理想條件下,，可檢測(cè)到l0-20mol/L的熒光素酶,。檢測(cè)步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測(cè)啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。2．設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動(dòng)子片段,，將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中,。3．篩選陽(yáng)性克隆，測(cè)序,。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用,。4．?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒，提純備用,。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對(duì)照,，提純備用。5．培養(yǎng)293（或其它目的細(xì)胞）,，并接種于24孔板中,，生長(zhǎng)10-24小時(shí)（80%匯合度）。6．將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測(cè),。8．加入底物，測(cè)定熒光素酶的活性,。9．計(jì)算相對(duì)熒光強(qiáng)度,，并與空載對(duì)照比較。無(wú)錫熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽試劑

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