是新型底物開(kāi)發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開(kāi)發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),,研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因,,即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子(19kDa)單體酶,,具有獨(dú)特的底物,,其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景,,為進(jìn)一步的技術(shù)開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ),。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)的供體,。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn),,紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測(cè)定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)??蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測(cè)量靶蛋白的結(jié)合,,或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè)。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,,Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng),,即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成:11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大,,更精細(xì)的NanoLuc?亞基,,LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合,。南京翌科生物科技有限公司的D-熒光素鉀鹽測(cè)試怎么樣,?無(wú)錫游離酸D-熒光素鉀鹽濃度
因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān),。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),生成氧化熒光素(oxyluciferin),,并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身,。熒光素的半衰期約三個(gè)小時(shí),,只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶。(1)熒光素不會(huì)影響動(dòng)物的正常生理功能,。(2)熒光素是280道爾頓的小分子,,水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障,。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快,,可通過(guò)腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)。腹腔注射擴(kuò)散較慢,,持續(xù)發(fā)光長(zhǎng),。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開(kāi)始發(fā)光,,10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點(diǎn),在更高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開(kāi)始衰減,,約3h后熒光素排除,,發(fā)光全部消失,更佳檢測(cè)時(shí)間是在注射后15~35min之間,;若進(jìn)行熒光素靜脈注射,,擴(kuò)散快,但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短,??蒲腥藛T根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg,即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素,。(4)觀察時(shí)間的間隔沒(méi)有更短限制,,只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動(dòng)物體內(nèi)有一定的代謝過(guò)程,。6-羧基熒光素二乙酸酯做D-熒光素鉀鹽測(cè)試找哪家公司,?
附錄ⅧB),與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對(duì)照液比較,,不得更濃(),。干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,,減失重量不得過(guò)%(附錄ⅧL),。鋅鹽取本品,加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,,加稀鹽酸2ml,,搖勻,濾過(guò),,濾液中加亞鐵**鉀試液1ml,,不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,,點(diǎn)于濾紙上,,即生成黃色斑點(diǎn),趁濕置溴蒸氣中,,1分鐘后再使與氨蒸氣接觸,,斑點(diǎn)即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強(qiáng)烈的熒光,,用大量的水稀釋后仍極明顯,;但加酸使成酸性后,熒光即消失;再加堿使成堿性,,熒光又顯出,。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)(附錄Ⅲ)。6含量測(cè)定編輯取本品約,,精密稱定,,加水20ml溶解后,加稀鹽酸5ml使熒光素析出,,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,每次20ml,,合并提取液,,用水10ml洗滌,洗液再用異丁醇-氯仿(1:1)5ml振搖提取,,合并提取液,,置105℃恒重的容器中,在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干,,殘?jiān)靡掖?0ml溶解后,,再置水浴上蒸干,并在105℃干燥至恒重,,精密稱定,,殘?jiān)亓颗c相乘,即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量,。熒光素鈉是一種有機(jī)化合物,,分子式為C20H10Na2O5,橙紅色粉末,,無(wú)氣味,,有吸濕性;易溶于水,,溶液呈黃紅色,,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光。
并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè),。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),,這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,,尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生,,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測(cè)系統(tǒng),。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,還可以檢測(cè)底物(luciferin)濃度的變化,。通過(guò)將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),,能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,,一種改進(jìn)的luciferin面世,,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin,,是新型底物開(kāi)發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開(kāi)發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因,,即NanoLuc?螢光素酶,。D-熒光素鉀鹽長(zhǎng)期保存是有效期一年。
luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光,。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi),。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,,雖然它們各不相同,。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,,Omphalotusoleariu')或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入,。一些生物,如叩頭蟲,,含有多種不同的熒光素酶,,能夠催化同一熒光素底物,而發(fā)出不同顏色的熒光,。螢火蟲有2000多種,,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲)則有更多,,因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。目前研究得更透徹的熒光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyrali')。應(yīng)用熒光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成,,并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn),。做D-熒光素鉀鹽的哪家便宜。南京D-熒光素鉀鹽活題成像
熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。無(wú)錫游離酸D-熒光素鉀鹽濃度
螢光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,,螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期,,這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺(tái),。1991年,Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品,,并啟動(dòng)了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計(jì)劃,,通過(guò)持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,,Promega***提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報(bào)告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性,。當(dāng)時(shí)的人們認(rèn)為,螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性,、極高的靈敏度和快速簡(jiǎn)單的檢測(cè)流程等特點(diǎn),可能會(huì)對(duì)分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響,。幾個(gè)月后,,***代螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因載體和檢測(cè)試劑在Promega誕生,使這項(xiàng)新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù),。隨后30年里,,Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新,保持技術(shù)***的地位,。這里提到的螢光素酶即熒光素酶,。[1]1991螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)。無(wú)錫游離酸D-熒光素鉀鹽濃度
南京翌科生物科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù),,是一家其他型公司,。公司業(yè)務(wù)分為外泌體提取,非編碼RNA試劑,,檢測(cè)試劑,,轉(zhuǎn)染試劑等,目前不斷進(jìn)行創(chuàng)新和服務(wù)改進(jìn),,為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù),。公司秉持誠(chéng)信為本的經(jīng)營(yíng)理念,在商務(wù)服務(wù)深耕多年,,以技術(shù)為先導(dǎo),,以自主產(chǎn)品為重點(diǎn),發(fā)揮人才優(yōu)勢(shì),,打造商務(wù)服務(wù)良好品牌,。翌科生物憑借創(chuàng)新的產(chǎn)品、專業(yè)的服務(wù)、眾多的成功案例積累起來(lái)的聲譽(yù)和口碑,,讓企業(yè)發(fā)展再上新高,。