而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生螢光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱，雖然它們各不相同,。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的螢光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng)。**為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,，而其所采用不同的螢光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇,，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物,，如叩頭蟲,，含有多種不同的螢光素酶，能夠催化同一螢光素底物,，而發(fā)出不同顏色的螢光,。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲,、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的螢光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。如今研究得**透徹的螢光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）,。[1]螢光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成，并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn),。螢光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶,、馬鈴薯等一些生物可以合成螢光素酶。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段,，可以對(duì)整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析：將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞,、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達(dá)）螢光素酶。D-熒光素有時(shí)候也叫游離酸,。徐州熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽試劑

    具體實(shí)驗(yàn)流程：注：該操作流程通常用來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的活性,，不適用于對(duì)細(xì)菌熒光素酶進(jìn)行檢測(cè)。1．實(shí)驗(yàn)***天，消化并接種細(xì)胞（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇合適的細(xì)胞）于35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿,，置于5％CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過(guò)夜,。2．等細(xì)胞密度達(dá)到70％時(shí)用Luciferase報(bào)告基因質(zhì)粒,、LacZ的表達(dá)質(zhì)粒及其它質(zhì)粒（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)確定）共轉(zhuǎn)染細(xì)胞（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇轉(zhuǎn)染方法，如磷酸鈣沉淀法,、PEI,、lipofectamine2000等均可）。3．轉(zhuǎn)染24－36h后,，吸取培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS（無(wú)鈣和鎂離子）洗滌細(xì)胞,。注：熒光酶的酶促反應(yīng)會(huì)被痕量的鈣所抑制,，故用磷酸鈣轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在收集細(xì)胞前應(yīng)充分洗滌除去含鈣介質(zhì)。4．在每個(gè)培養(yǎng)皿中加入350μl預(yù)冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細(xì)胞,。5．在細(xì)胞裂解期間,，準(zhǔn)備足量的ml微量離心管，將ATPbuffer與luciferinbuffer以1：,，每管100μl。6．依次取等體積的細(xì)胞裂解液（100μl）至步驟5中的離心管中,，迅速混勻,，在發(fā)光儀（Luminometer）上讀取吸光值。注：發(fā)光反應(yīng)會(huì)迅速衰減,，將細(xì)胞裂解液加入反應(yīng)液后5s內(nèi)必須讀取吸光值,。7．確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后。揚(yáng)州體外研究D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期D-熒光素鉀鹽使用的注意事項(xiàng),。

    短期保存：4℃干燥避光長(zhǎng)期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1）用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),，混勻,。立即使用，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融,。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。作者：思存鏈接：zhuanlan./p/來(lái)源：知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。高斯熒光素酶近年來(lái),，其他熒光素酶（例如高斯熒光素酶）的使用有所增加,，因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小，并且不需要ATP的存在,。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),，可通過(guò)氧氣催化腔腸素氧化，產(chǎn)生光,。來(lái)自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來(lái),。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（#AAT-12530）使用專有的發(fā)光配方來(lái)定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),，產(chǎn)sheng發(fā)光產(chǎn)物，該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光,。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn)：提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度,。

    Q：熒光素酶作為報(bào)告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢(shì),？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時(shí)具有更寬的動(dòng)態(tài)范圍,，便于數(shù)值分析比較,，不需要熒光顯微鏡，而且在***實(shí)驗(yàn)中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白,，同時(shí)由于沒(méi)有內(nèi)源活性,、其本底信號(hào)很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢(shì)在于可以進(jìn)行失蹤定位,，并且其觀測(cè)不需裂解細(xì)胞,，方便進(jìn)行適時(shí)觀察,。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比，相對(duì)活性如何,？在氧,、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素,，而來(lái)源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素,。雙報(bào)告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測(cè)試和海腎熒光素酶測(cè)試。Q：雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)轉(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來(lái)是什么原因,？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個(gè)方面改善,，首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的，通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞,，另外陽(yáng)性對(duì)照您可以選擇過(guò)表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒,，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要，更好是先酶切驗(yàn)證,。這個(gè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果很靈敏,，有一定差異是正常的，通常只要確保它在一個(gè)數(shù)量級(jí)之內(nèi)即可,。如果差異超出這個(gè)范圍可以從兩方面改善,，一是記住保持樣本的均一性。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽比較靠譜,。

    luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：，在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,，并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口，產(chǎn)品價(jià)格昂貴,。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果,。所以,，需要國(guó)產(chǎn)化的方式生產(chǎn)，一方面可以降低成本,，一方面可以增強(qiáng)使用效果,。作者：科遠(yuǎn)迪鏈接：zhuanlan./p/來(lái)源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處,。D-luciferin,，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說(shuō)明書發(fā)光原理哺乳動(dòng)物生物發(fā)光,，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個(gè)氨基酸構(gòu)成,，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株,，當(dāng)細(xì)胞分裂,、轉(zhuǎn)移,、分化時(shí),熒光素酶也會(huì)得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)?；?、細(xì)胞和活題動(dòng)物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后,，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin，potassiumsalt,，以下均簡(jiǎn)稱熒光素),，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長(zhǎng)在540-600nm,。這種酶在ATP,，氧存在的條件下，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光,。D-熒光素鉀鹽測(cè)試適用范圍包括哪些,？連云港體外研究D-熒光素鉀鹽生物公司

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    從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的***功效等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響,，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級(jí)純（）應(yīng)用：1）活細(xì)胞,、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析,；2）***用于報(bào)告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析,；Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測(cè)1）配制成100mM的儲(chǔ)存液（200×,，濃度30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存,。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液，配制工作液(終濃度150μg/mL),。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無(wú)殘留。4）圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,，然后進(jìn)行圖像分析（或者細(xì)胞放在37℃短時(shí)間孵育后檢測(cè)可增強(qiáng)信號(hào)）,。D-熒光素鉀鹽注：螢光素、螢光素酶,、螢火蟲螢光素酶,、螢光素鉀鹽,、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱作熒光素、熒光素酶,、螢火蟲熒光素酶、熒光素鉀鹽,、熒光素鈉鹽,。Protocol2：Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1）用無(wú)菌的DPBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL),，,。一旦使用，保持冰冷且避光,。徐州熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽試劑

南京翌科生物科技有限公司是一家翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),，建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái),。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,，包括外泌體提取與檢測(cè)試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑,、轉(zhuǎn)染試劑,、microRNA 表達(dá)文庫(kù),、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子,、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù),。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā),，服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校、研究所,、醫(yī)院,、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶,。的公司,，致力于發(fā)展為創(chuàng)新務(wù)實(shí)、誠(chéng)實(shí)可信的企業(yè),。翌科生物深耕行業(yè)多年,，始終以客戶的需求為向?qū)В瑸榭蛻籼峁?**的外泌體提取,，非編碼RNA試劑,，檢測(cè)試劑，轉(zhuǎn)染試劑,。翌科生物始終以本分踏實(shí)的精神和必勝的信念,，影響并帶動(dòng)團(tuán)隊(duì)取得成功。翌科生物始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)市場(chǎng),，以敏銳的市場(chǎng)洞察力,，實(shí)現(xiàn)與客戶的成長(zhǎng)共贏。