可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達(dá),。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn)：①非放射性,；②比CAT及其他報(bào)告基因速度快；③比CAT靈敏100倍；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí),，在植物中的半衰期為3．5小時(shí),。由于半衰期短,，故啟動子的改變會即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變,，而熒光素酶不會積累。相反,，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí),。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi)，熒光信號強(qiáng)度與酶濃度成正比,。在理想條件下,，可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),。2．設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段,，將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中。3．篩選陽性克隆,，測序,。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用,。4．?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒，提純備用,。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對照,，提純備用。5．培養(yǎng)293（或其它目的細(xì)胞）,，并接種于24孔板中,，生長10-24小時(shí)（80%匯合度）。6．將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測,。8．加入底物，測定熒光素酶的活性,。9．計(jì)算相對熒光強(qiáng)度,，并與空載對照比較。D-熒光素鉀鹽運(yùn)輸條件是4℃冰袋運(yùn)輸,。連云港專業(yè)做D-熒光素鉀鹽

    包括熒光素酶和ATP水平分析,；報(bào)告基因分析；高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸）,，D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,。可溶于甲醇和DMSO,；后者能夠易溶于水或緩沖液中，使用方便,，溶劑無毒性,，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別,。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件：4℃冰袋運(yùn)輸；短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),，混勻。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min,，然后進(jìn)行圖像分析,。2.活題成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.）,。南通專業(yè)做D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光,。

    SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應(yīng)用：1）體外化學(xué)發(fā)光分析（invitro）；2）***成像實(shí)驗(yàn)（invivo）,；3）高靈敏度ATP分析,；步驟：Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽，配制成100mM的儲存液（200×,，濃度30mg/ml）,。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存,。2）用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液,，配置工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基,。4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析,。Protocol2：Invivoanalysis/***成像分析1）用無菌的PBS（w/oMg2+,、Ca2+）配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL)，,。一旦使用,，保持冰冷且避光。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物,，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,，尤其是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光（見下圖）,。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后,，導(dǎo)入研究動物如大,、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素,，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強(qiáng)度變化,。

    其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下,，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,，而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）,。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,，而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng),。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同,。在螢火蟲中,，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物,，如叩頭蟲,，含有多種不同的熒光素酶，能夠催化同一熒光素底物,。南京靠譜的D-熒光素鉀鹽測試公司。

    因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,，并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān),。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,，約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身,。熒光素的半衰期約三個(gè)小時(shí),，只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶。(1)熒光素不會影響動物的正常生理功能,。(2)熒光素是280道爾頓的小分子,，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障,。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快,，可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動物體內(nèi)。腹腔注射擴(kuò)散較慢,，持續(xù)發(fā)光長,。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光，10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點(diǎn),，在更高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開始衰減,，約3h后熒光素排除，發(fā)光全部消失,，更佳檢測時(shí)間是在注射后15~35min之間,；若進(jìn)行熒光素靜脈注射，擴(kuò)散快,，但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短,。科研人員根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg,，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素,。(4)觀察時(shí)間的間隔沒有更短限制，只要觀察的條件控制一致就可以,。雖然底物在動物體內(nèi)有一定的代謝過程,。D-熒光素鉀鹽的合作平臺有哪些？鎮(zhèn)江游離酸D-熒光素鉀鹽活題成像

D-熒光素鉀鹽一般都是使用什么技術(shù),。連云港專業(yè)做D-熒光素鉀鹽

    熒光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶,、馬鈴薯等一些生物可以合成熒光素酶,。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段，可以對整個(gè)動物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析：將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞,、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達(dá)）熒光素酶,，就可以用高敏感度的CCD相機(jī)進(jìn)行對動物體內(nèi)進(jìn)行活ti觀察而不會傷害到動物本身。在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光,，而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,，如熒光探測器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測到。這就使得對包括影響在內(nèi)的多種生命活動進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能。例如,，熒光素酶可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂,。法醫(yī)可以用含有熒光素酶的溶液來檢測犯罪現(xiàn)場中殘留的血跡。醫(yī)院用熒光素酶的發(fā)光來發(fā)現(xiàn)特定的疾病,。熒光素酶還可以作為“報(bào)告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中,，例如，用于在轉(zhuǎn)染過熒光素酶的細(xì)胞中檢測特定啟動子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平,；這一技術(shù)被稱為報(bào)告基因檢測法或熒光素酶檢測法（LuciferaseAssay）,。熒光素酶是一個(gè)熱敏感蛋白，因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護(hù)能力,。連云港專業(yè)做D-熒光素鉀鹽