這是一種小分子（19kDa）單體酶,，具有獨特的底物,，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍,。這種新型的報告基因有著***的應(yīng)用前景,，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ),。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征,。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體,。一項針對各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn),，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn),?？蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測,。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,，Promega的科學(xué)家努力將該報告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個氨基酸的小標(biāo)簽和一個更大,，更精細(xì)的NanoLuc?亞基,，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補結(jié)合,，重組為一個明亮的螢光素酶,。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低，從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測定,；也可以和HiBiT一樣高,，從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽比較靠譜,。無錫專業(yè)做D-熒光素鉀鹽生物公司

    熒光素鈉[1]，橙紅色粉末,，無氣味,，有吸濕性；易溶于水,，溶液呈黃紅色,，并帶極強的黃綠色熒光，酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn),，微溶于乙醇；比較大吸收波長(水),?；拘畔⑺幤访Q熒光素鈉拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM來源(分子式)與標(biāo)準(zhǔn)本品為9-(鄰羧基苯基)-6-羥基-3H-噸-3-酮二鈉鹽。按干燥品計算,，含C20H10Na2O5不得少于,。類別診斷用藥。劑量滴眼2%溶液貯藏密封保存,。制劑熒光素鈉注射液2化學(xué)性質(zhì)編輯中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名稱：FluoresceindisodiumsaltCAS號：518-47-8[2]熒光素鈉分子式：C20H10Na2O5分子量：等級：BSMDL號：MFCD00167039Beilstein號：3833041EC號：208-253-0熒光素鈉[1]3性狀描述編輯本品為橙紅色粉末,；無臭，幾乎無味,；有引濕性,。本品在水中易溶，在乙醇中略溶,。橙紅色粉末,，無氣味，有吸濕性,；易溶于水,，溶液呈黃紅色,，并帶極強的黃綠色熒光，酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn),，微溶于乙醇；比較大吸收波長(水),。4檢查資料編輯氯化物取本品,，分取溶液10ml，依法檢查（附錄ⅧA）,，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液制成的對照液比較,，不得更濃（）。硫酸鹽取上述氯化物項下剩余的溶液25ml,，依法檢查,。泰州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期D-熒光素鉀鹽適用于哪些領(lǐng)域？

    包括熒光素酶和ATP水平分析,；報告基因分析,；高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸）,，D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）,。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,?？扇苡诩状己虳MSO；后者能夠易溶于水或緩沖液中,，使用方便,，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實驗,。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運輸和保存運輸條件：4℃冰袋運輸,；短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×)，混勻,。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融,。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析,。2.活題成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌,。立即使用，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融,。3）腹腔注射（.）。

    常見的熒光素酶有兩種,，分別是螢火蟲熒光素酶（fireflyluciferase,，編碼基因是luc）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase，編碼基因是Rluc）,，前者的底物是D-Luciferin,，后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,，底物被氧化發(fā)光（不同底物光的顏色和波長不同）,，當(dāng)?shù)孜镞^量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性,。***成像技術(shù)（opticalinvivoimaging）目前主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術(shù),，生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化學(xué)發(fā)光的原理，將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動物體內(nèi),，與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng),，利用光學(xué)系統(tǒng)檢測光強度，間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位,。這項技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個領(lǐng)域常用的有**或疾病動物模型的建立,，并可用于病毒學(xué)研究、siRNA研究,、干細(xì)胞研究,、蛋白質(zhì)相互作用研究等。以下主要介紹D-Luciferin（D熒光素）的分類：D-Luciferin：有三種,，分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽,、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素。D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光,。

    附錄ⅧB）,，與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對照液比較，不得更濃（）,。干燥失重取本品,，在105℃干燥至恒重,，減失重量不得過%（附錄ⅧL）。鋅鹽取本品,，加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,，加稀鹽酸2ml，搖勻,，濾過,，濾液中加亞鐵**鉀試液1ml，不得發(fā)生渾濁,。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,，點于濾紙上，即生成黃色斑點,，趁濕置溴蒸氣中,，1分鐘后再使與氨蒸氣接觸，斑點即變?yōu)樯罘奂t色,。(2)本品的水溶液顯強烈的熒光,，用大量的水稀釋后仍極明顯；但加酸使成酸性后,，熒光即消失,；再加堿使成堿性，熒光又顯出,。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）,。6含量測定編輯取本品約，精密稱定,，加水20ml溶解后,，加稀鹽酸5ml使熒光素析出，用丁醇－氯仿(1:1)提取4次,，每次20ml,，合并提取液，用水10ml洗滌,，洗液再用異丁醇－氯仿(1:1)5ml振搖提取,，合并提取液，置105℃恒重的容器中,，在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干,，殘渣用乙醇10ml溶解后，再置水浴上蒸干,，并在105℃干燥至恒重,，精密稱定，殘渣重量與相乘,，即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量,。熒光素鈉是一種有機化合物,，分子式為C20H10Na2O5，橙紅色粉末,，無氣味,，有吸濕性；易溶于水,，溶液呈黃紅色,，并帶極強的黃綠色熒光,。D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司,。揚州熒光素酶D-熒光素鉀鹽試劑

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    D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品,。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物,，普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活題成像技術(shù),。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下,，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時,，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）,。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，構(gòu)建原位腫大的瘤模型,，之后注入熒光素底物,，通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強度變化，從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價等,。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響,，根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。注：在抗腫大的瘤藥物藥效評價試驗中,，由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定腫大的瘤大小,，受腫大的瘤生長所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響，生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評價腫大的瘤生長,，在抗腫大的瘤藥效評價有較高要求的實驗中,，建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長。D-熒光素也常用于體外研究,。無錫專業(yè)做D-熒光素鉀鹽生物公司