可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑(Renillareniformis)分離的36kDa蛋白,。與螢火蟲熒光素酶相比,,海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同,。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,產(chǎn)生480nm的藍(lán)光,。與螢火蟲螢光素酶類似,海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報告檢測,。Amplite?海腎熒光素酶報告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報告基因檢測試劑盒(#AAT-12535)提供了一種快速,,靈敏的方法,可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性,,與海腎螢光素酶相互作用后,,該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物。Amplite?海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒特點(diǎn):該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分各類螢光素酶底物,輔因子和物理特性:近幾十年來,,腺苷三磷酸(ATP)生物發(fā)光技術(shù)得到了很大的發(fā)展,,已經(jīng)在細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和生物量計數(shù)等方面廣泛應(yīng)用,。D-熒光素鉀鹽測試怎么樣,?無錫熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商
后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,,溶劑無毒性,,特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別,。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件:4℃冰袋運(yùn)輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),,混勻。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,,37℃孵育5-10min,,然后進(jìn)行圖像分析。2.***成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌,。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。3)腹腔注射(.),,按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,以小鼠為例,,每只小鼠體重假定20g,,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期)后進(jìn)行成像分析,。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,,從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。 無錫熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商D-熒光素鉀鹽測試需要哪些必備條件?
可運(yùn)用熒光素酶報告系統(tǒng)分析其相對活性,。c.驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用,,將該序列(通常為啟動子區(qū)域)插入報告基因載體,同時在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞***轉(zhuǎn)過表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子,,可分析轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)是否提高熒光素酶活性,。d.可以分析信號通路是否***,將該信號通路的下游響應(yīng)原件序列構(gòu)建入報告基因載體,,在不同上游信號條件下,,熒光素酶活性**了通路的下游響應(yīng)。例如在GPCR研究中,,將cAMPresponseelement(CRE)載入報告基因載體,,構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株后,可以用于分析GPRC的***與6b7a976f-99ae-4c48-8159-4bd篩選,。又如,,將HIF1α的響應(yīng)原件hypoxia-responsiveelement(HRE)插入luciferase報告載體構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,可以用于低氧相關(guān)通路的研究,。e.驗(yàn)證microRNA的靶序列,將待測的3’UTR序列插入報告基因載體,,再共轉(zhuǎn)入該microRNA,,如果熒光素酶活性下降,則提示為其靶序列,。Q:在[信諾金達(dá)]做熒光素酶報告基因檢測,,需要提供什么?實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括哪些,?您需要提供:1.基因序列或模板,,需提供詳細(xì)的轉(zhuǎn)錄因子、目的基因或microRNA信息,;2.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,,[信諾金達(dá)]默認(rèn)為使用293T細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,,[信諾金達(dá)]會為您提供實(shí)驗(yàn)流程及完整報告一份,,包括實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)、圖片,、分析結(jié)果等,。
4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,,37℃孵育5-10min,,然后進(jìn)行圖像分析,。2.活ti成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,,混勻,。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。3)腹腔注射(.),,按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,,以小鼠為例,每只小鼠體重假定20g,,每只小鼠用量3mg,;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期)后進(jìn)行成像分析。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,,從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。注意事項1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,,以CAS號115144-35-9為準(zhǔn),。2)注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測,,盡量避免外源ATP的污染,,如操作時戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,在進(jìn)行熒光素的溶解時應(yīng)使用ATP-free無菌水,。4)為避免反復(fù)凍融,,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,,如有條件,,可以對儲存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊4妗-熒光素鉀鹽的活題成像技術(shù),。
luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子,,而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,,雖然它們各不相同,。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,,Omphalotusoleariu')或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入,。一些生物,如叩頭蟲,,含有多種不同的熒光素酶,,能夠催化同一熒光素底物,而發(fā)出不同顏色的熒光,。螢火蟲有2000多種,,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲)則有更多,,因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyrali')。應(yīng)用熒光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成,,并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn),。做D-熒光素鉀鹽測試價格是多少。南京D-熒光素鉀鹽試劑
D-熒光素鉀鹽測試適用范圍包括哪些,?無錫熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商
海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報告檢測,。Amplite?海腎熒光素酶報告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報告基因檢測試劑盒提供了一種快速,靈敏的方法,,可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性,與海腎螢光素酶相互作用后,,該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物,。Amplite?海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒特點(diǎn):該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分。熒光素酶是生物體內(nèi)催化熒光素等物質(zhì)氧化發(fā)光的一類酶的總稱,。自然界中,,不同的發(fā)光生物擁有不同的熒光素酶,除了螢火蟲熒光素酶(FireflyLuciferase)之外,,還有發(fā)光細(xì)菌體內(nèi)的細(xì)菌熒光素酶,、發(fā)光海星的海星熒光素酶等。目前,,人們對螢火蟲熒光素酶的研究**多,、應(yīng)用***。一則關(guān)于手機(jī)上的細(xì)菌的新聞里,,**在用ATP熒光檢測儀檢測手機(jī)表面的細(xì)菌,。ATP是一種在動物,、植物和細(xì)菌等活細(xì)胞中都存在的能量物質(zhì),由前述的反應(yīng)式可知,,ATP與熒光素,、熒光素酶反應(yīng)發(fā)出熒光。檢測樣品中的微生物越多,,ATP就越多,,熒光反應(yīng)的光亮就越大。無錫熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商