D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品,。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物,，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活題成像技術(shù),。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光,。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）,。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,，構(gòu)建原位腫大的瘤模型,，之后注入熒光素底物，通過IVIS系統(tǒng)來檢測(cè)光強(qiáng)度變化,，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評(píng)價(jià)等,。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征,。注：在抗腫大的瘤藥物藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)中,，由于生物自發(fā)光檢測(cè)需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定腫大的瘤大小，受腫大的瘤生長(zhǎng)所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響,，生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評(píng)價(jià)腫大的瘤生長(zhǎng),，在抗腫大的瘤藥效評(píng)價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中，建議使用小動(dòng)物核磁成像系統(tǒng)檢測(cè)腫大的瘤生長(zhǎng),。D-熒光素也常用于體外研究,。D-熒光素也常用于身體的外部研究?；窗睤-熒光素鉀鹽使用說明

    熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,，其中**有7a70d2e3-5dda-4f49-84be-c6的是來自螢火蟲體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類螢光素酶，分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase,，同時(shí)近年來研究得較多的來源于高斯氏菌的高斯熒光素酶（Gaussluciferase）,。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中,，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence),，可通過熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究,。螢火蟲螢光素酶**通用和**常見的報(bào)告基因是北美螢火蟲photinuspyralis的熒光素酶,，該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性,。高濃度（體內(nèi)）甚至沒有毒性,，可用于原核和真核細(xì)胞。Amplite?螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（12518）使用無DTT**配方來定量活細(xì)胞和細(xì)胞提取物中的螢光素酶活性,。該測(cè)定基于螢火蟲熒光素酶,，螢火蟲熒光素酶是一種單體的61kD酶，可催化熒光素的兩步氧化,，在560nm處產(chǎn)生光,。Amplite?螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒特點(diǎn)：具有優(yōu)化的“混合讀取”測(cè)定規(guī)程，可與HTS液體處理儀器兼容具有高靈敏度,。鎮(zhèn)江體外研究D-熒光素鉀鹽試劑D-熒光素鉀鹽檢測(cè)的安全性如何保障,？

    可用熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)靈敏方便地測(cè)定熒光素酶基因的表達(dá)。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn)：①非放射性,；②比CAT及其他報(bào)告基因速度快,；③比CAT靈敏100倍,；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí)，在植物中的半衰期為3．5小時(shí),。由于半衰期短,，故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會(huì)積累,。相反,，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí)。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi),，熒光信號(hào)強(qiáng)度與酶濃度成正比,。在理想條件下，可檢測(cè)到l0-20mol/L的熒光素酶,。檢測(cè)步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測(cè)啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),。2．設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動(dòng)子片段，將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中,。3．篩選陽性克隆,，測(cè)序。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用,。4．?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒,，提純備用。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對(duì)照,，提純備用,。5．培養(yǎng)293（或其它目的細(xì)胞），并接種于24孔板中,，生長(zhǎng)10-24小時(shí)（80%匯合度）,。6．將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測(cè),。8．加入底物,，測(cè)定熒光素酶的活性。9．計(jì)算相對(duì)熒光強(qiáng)度,，并與空載對(duì)照比較,。

    這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨(dú)特的底物,，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍,。這種新型的報(bào)告基因有著***的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ),。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征,。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測(cè)定相關(guān)的一些挑戰(zhàn),?？蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測(cè)量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè),。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,，Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?,。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大,，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT,。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合,，重組為一個(gè)明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,，從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測(cè)定,；也可以和HiBiT一樣高，從而允許自我組裝,。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,。D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。

    8．取剩余裂解液測(cè)定LacZ的活性,，其讀數(shù)作為內(nèi)標(biāo)用以矯正熒光素酶的讀數(shù),。9.用矯正后的讀數(shù)作圖，分析數(shù)據(jù),。注：熒光素見光易氧化,，已稀釋未用的熒光素應(yīng)丟棄。注意事項(xiàng)：1．熒光素酶檢測(cè)試劑需在15-25℃條件下預(yù)平衡后再進(jìn)行反應(yīng),，而后依據(jù)具體條件進(jìn)行自動(dòng)或手動(dòng)檢測(cè),。當(dāng)用液閃計(jì)數(shù)儀時(shí)，加入熒光素酶檢測(cè)試劑后立即輕輕混勻,。2．如果細(xì)胞裂解后不能立即對(duì)提取物進(jìn)行檢測(cè),，樣品可以在冰上保存大約5h，在-70℃可保存數(shù)月,。不要反復(fù)凍融以避免酶活性的降低,。3．利用上述方法檢測(cè)冷的樣品時(shí)，其信號(hào)強(qiáng)度將下降5-15%,。4．在熒光素酶活性較高的情況下，導(dǎo)致信號(hào)超出線性范圍（信號(hào)溢出）可用裂解液將樣品進(jìn)行稀釋,。5．不要儲(chǔ)存稀釋過的樣品,。如果必須保存，要在稀釋的樣品中加入BSA至終濃度為,，這樣可以保持樣品的穩(wěn)定性,。6．一些熒光儀在進(jìn)行檢測(cè)前需要1-2s的穩(wěn)定,，因此建議在開機(jī)后過一段時(shí)間再進(jìn)行檢測(cè)操作。熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)主要有哪些用途,？a.啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析,，將啟動(dòng)子區(qū)域序列（通常2k左右）進(jìn)行分段截短，或?qū)μ囟ㄎ稽c(diǎn)進(jìn)行突變,，再分別構(gòu)建入luciferase報(bào)告載體,，檢測(cè)其啟動(dòng)子活性。b.啟動(dòng)子SNP分析,，一些基因的啟動(dòng)子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性,。D-熒光素鉀鹽長(zhǎng)期保存條件是-20℃干燥避光。上海專業(yè)做D-熒光素鉀鹽

D-熒光素鉀鹽測(cè)試適用范圍包括哪些,？淮安D-熒光素鉀鹽使用說明

    或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min,，然后進(jìn)行圖像分析。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,，混勻。2）用μm濾膜過濾除菌,。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融,。3）腹腔注射（.）,，按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射。4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析,。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）只只是不同公司在命名上的差異,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylicacid,。2）注射方式,、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間,。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè)，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水,。淮安D-熒光素鉀鹽使用說明