注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）,、螢光素鉀鹽只是不同別名,，以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2）注射方式,、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間,。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水。4）為避免反復(fù)凍融,，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化，如有條件,，可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊４妗?）對(duì)于檢測(cè)靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn),，建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6）在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí),，應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,，因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響,，從而影響檢測(cè),。7）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。8）本產(chǎn)品只作科研用途,！D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長(zhǎng)是多長(zhǎng)？泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽

    4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析,。2.活ti成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌,。立即使用，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融,。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,，以小鼠為例,，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析,。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）,、螢光素鉀鹽只是不同別名,，以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2）注射方式,、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間,。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水,。4）為避免反復(fù)凍融，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化,，如有條件，可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊４?。?zhèn)江螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽哪家好D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽,。

    因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象，并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān),。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身,。熒光素的半衰期約三個(gè)小時(shí),，只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶。(1)熒光素不會(huì)影響動(dòng)物的正常生理功能,。(2)熒光素是280道爾頓的小分子,，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障,。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快,，可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)。腹腔注射擴(kuò)散較慢,，持續(xù)發(fā)光長(zhǎng),。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光，10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點(diǎn),，在更高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開始衰減,，約3h后熒光素排除,，發(fā)光全部消失，更佳檢測(cè)時(shí)間是在注射后15~35min之間,；若進(jìn)行熒光素靜脈注射,，擴(kuò)散快，但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短,?？蒲腥藛T根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素,。(4)觀察時(shí)間的間隔沒有更短限制,，只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動(dòng)物體內(nèi)有一定的代謝過程,。

    螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號(hào)分子，可以用來標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報(bào)告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7,，利用G418篩選,，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評(píng)價(jià)其發(fā)光能力,。通過建立裸鼠移植瘤模型,，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測(cè)腫大的瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移情況，為下一步監(jiān)測(cè)裸鼠移植瘤對(duì)藥物作用的變化情從而為分析藥物對(duì)腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0,、200,、400、600,、800,、1000μg/ml設(shè)置6個(gè)濃度梯度。在細(xì)胞接種24h后,，加入6孔板中,，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)孔在10～14d內(nèi)全部死亡。每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,，死亡更低的G418濃度,，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF－7細(xì)胞,，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%孔培養(yǎng)板中,，TM即可轉(zhuǎn)染。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。在250μl無血清,、無雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無血清、無雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000,，室溫培育5min,。將上述2種稀釋液混勻,。D-熒光素鉀鹽測(cè)試怎么樣？

    luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：,，在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,，并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口,，產(chǎn)品價(jià)格昂貴,。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果,。所以,，需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn)，一方面可以降低成本,，一方面可以增強(qiáng)使用效果,。作者：科遠(yuǎn)迪鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處,。D-luciferin，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動(dòng)物生物發(fā)光,，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個(gè)氨基酸構(gòu)成,，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株,，當(dāng)細(xì)胞分裂,、轉(zhuǎn)移、分化時(shí),熒光素酶也會(huì)得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá),?；颉⒓?xì)胞和活題動(dòng)物都可被熒光素酶基因標(biāo)記,。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后,，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin，potassiumsalt,，以下均簡(jiǎn)稱熒光素),，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長(zhǎng)在540-600nm,。這種酶在ATP,，氧存在的條件下，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試品牌有哪些,？泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽

D-熒光素鉀鹽的發(fā)射波長(zhǎng)是多少,？泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽

    我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,，具有多種功能,，例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí)，可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型,。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,，人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測(cè)定的組分檢測(cè)多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)（現(xiàn)稱為“Lumit”）提供了具有高靈敏度的簡(jiǎn)化免疫檢測(cè)法,。螢光素酶（英語：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,，其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有螢光素酶的情況下,，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,，而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）,。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光,。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,，只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi),。螢光素或螢光素酶不是特定的分子,。泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽