螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號分子,，可以用來標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報告基因的真核表達重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7,，利用G418篩選,，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc,，并在穩(wěn)定表達熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評價其發(fā)光能力,。通過建立裸鼠移植瘤模型,，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長及轉(zhuǎn)移情況,，為下一步監(jiān)測裸鼠移植瘤對藥物作用的變化情從而為分析藥物對腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0,、200,、400,、600,、800、1000μg/ml設(shè)置6個濃度梯度,。在細(xì)胞接種24h后,，加入6孔板中，每個濃度設(shè)2個孔在10～14d內(nèi)全部死亡,。每天觀察細(xì)胞生長情況,，死亡更低的G418濃度，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度,。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對數(shù)生長期的MCF－7細(xì)胞,，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達到80%～90%孔培養(yǎng)板中，TM即可轉(zhuǎn)染,。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進行轉(zhuǎn)染,。在250μl無血清、無雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無血清,、無雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000,，室溫培育5min。將上述2種稀釋液混勻,。D-熒光素鉀鹽測試適用范圍包括哪些,？常州D-熒光素鉀鹽活題成像
故根據(jù)熒光反應(yīng)的情況可以檢測樣品中的微生物含量。APT熒光檢測儀***用于食品,、飲用水,、餐飲器具等的微生物快速檢測。1970年,，科學(xué)家***次測定了螢火蟲熒光素酶的結(jié)構(gòu),；1985年，科學(xué)家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因,，并在大腸桿菌中表達,，從而得到了具有活性的熒光素酶；1986年,，科學(xué)家們測定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列,。隨后，各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功,，熒光素酶的研究和應(yīng)用不斷發(fā)展,。目前，熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué),、生命科學(xué),、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)等許多領(lǐng)域。以醫(yī)學(xué)領(lǐng)域為例,，**們將熒光素酶基因嵌入到*細(xì)胞中,，再注入熒光素，使*細(xì)胞發(fā)光,，通過探測熒光,，就能監(jiān)測*細(xì)胞的擴散和轉(zhuǎn)移。同理,，用這種方法能對致病基因,、***免疫機制等進行研究，對某些疾病進行診斷,，監(jiān)測疫苗,、藥物和治療方法的效力。熒光素異硫氰酸酯-葡聚糖D-熒光素鉀鹽測試比較好的公司有哪幾個,？
但是上一次底物的殘留曲線可以知道,，可以控制對下一次觀察結(jié)果的影響。儲存與運輸一般放在-20℃的冰箱即可,，半年以上不使用放在-80℃的冰箱,，溶解配制后放在4℃冰箱,，短期運輸放在4℃環(huán)境,。建議現(xiàn)用現(xiàn)配，D熒光素鉀鹽在液體中容易降解,。應(yīng)用領(lǐng)域腫大的瘤,，干細(xì)胞，藥物開發(fā),，基因治的好,，轉(zhuǎn)基因小鼠，免疫學(xué)等等,。英文名字firefly.中文名稱熒光素酶,，重組熒光素貨號AAT-12500規(guī)格￥1430/1mL背景資料：熒光素酶是來自北美螢火蟲（Photinuspyralis）中熒光素酶基因的克隆和重組表達，它為實驗研究或者用生物熒光試劑制備試劑盒檢測ATP或者熒光素底物提供了可信度和可靠性,。這種重組酶可以克服由天然資源純化獲得熒光素酶時受季節(jié)和地方區(qū)域變化的影響,。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中,，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence),，可通過熒光測定儀設(shè)備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗證等方向研究,。產(chǎn)品形式提供的熒光素酶*重組熒光素*產(chǎn)品為溶液形式,。作者：思存鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處,。
2）按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液,；3）腹腔注射10-15min后進行成像分析。（對每只動物模型做熒光素動力學(xué)研究以確定峰值信號獲取時間）Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外觀：白色至淺黃色粉末溶解：,，形成近乎無色至淺黃色的清夜保存：-15°C避光應(yīng)用：1）活細(xì)胞,、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達的成像分析；2）***用于報告基因分析,，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究,，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析,；高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸），D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）,。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液，可溶于甲醇和DMSO,；后者易溶于水或緩沖液中,，使用方便，溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性,，特別適合體內(nèi)實驗,。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別,。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二,。做D-熒光素鉀鹽測試價格是多少。
因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,，并且發(fā)光光強度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān),。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進入小鼠體內(nèi)的,，約一分鐘就可以擴散到小鼠全身,。熒光素的半衰期約三個小時，只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達熒光素酶,。(1)熒光素不會影響動物的正常生理功能,。(2)熒光素是280道爾頓的小分子，水溶性和脂溶性都非常好,，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障,。(3)熒光素在體內(nèi)擴散速度快,，可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進入動物體內(nèi)。腹腔注射擴散較慢,，持續(xù)發(fā)光長,。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光，10min后強度達到穩(wěn)定的更高點,，在更高點持續(xù)約20~30min后開始衰減,，約3h后熒光素排除，發(fā)光全部消失,，更佳檢測時間是在注射后15~35min之間,；若進行熒光素靜脈注射，擴散快,，但發(fā)光持續(xù)時間很短,。科研人員根據(jù)大量的實驗總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg,，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素,。(4)觀察時間的間隔沒有更短限制，只要觀察的條件控制一致就可以,。雖然底物在動物體內(nèi)有一定的代謝過程,。D-熒光素鉀鹽使用的注意事項。熒光素異硫氰酸酯-葡聚糖
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