在食品衛(wèi)生領(lǐng)域由于ATP生物發(fā)光技術(shù)無需培養(yǎng)過程,,操作簡(jiǎn)便,、靈敏度高,,數(shù)分鐘內(nèi)可得到結(jié)果,具有其它微生物檢測(cè)方法無法比擬的優(yōu)勢(shì),,是目前檢測(cè)微生物更快的方法。熒光素是更受歡迎的多功能生物熒光底物之一,。在螢火蟲和幾種其它甲蟲中發(fā)現(xiàn)了螢火蟲熒光酶/熒光素,。通過中間體dioxetanone介導(dǎo)作用,熒光素酶氧化ATPji活的熒光素,。螢火蟲熒光素酶在ATP的輔助下氧化熒光素產(chǎn)生熒光,。這個(gè)反應(yīng)發(fā)生的幾秒內(nèi)在560nm處的化學(xué)熒光達(dá)到更高峰,當(dāng)熒光素和ATP都超量存在的條件下,,發(fā)射光與熒光素酶的活性成比例關(guān)系,。螢火蟲熒光素酶很早以前就用于與抗體結(jié)合形成偶聯(lián)物,作為免疫分析中用熒光素作為底物進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)簽。與HRP和堿性磷酸酶相比,,熒光素酶不耐化學(xué)修飾,。這個(gè)酶的一個(gè)特殊的優(yōu)點(diǎn)是,除了高靈敏度外,,在哺乳動(dòng)物組織中內(nèi)源性熒光素酶的活性很低,。熒光素酶另一個(gè)重要的作用是用于衛(wèi)生監(jiān)測(cè)。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測(cè)污染,,因?yàn)楫a(chǎn)生熒光所需的ATP存在于所以活ti生物中,。這種類型的ATP生物熒光特性足以保證對(duì)食品表面的檢測(cè),無論是在加工制作工程中設(shè)備的污染還是產(chǎn)品的污染都能檢出,。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,。D-熒光素鉀鹽測(cè)試方法是體外生物發(fā)光檢測(cè)。熒光增白劑pf
通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué),,例如Bright-Glo?,、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡(jiǎn)化了樣品處理,,并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè),。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法,。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),,這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,尤其是在高通量應(yīng)用中,。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生,,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測(cè)系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,,還可以檢測(cè)底物(luciferin)濃度的變化,。通過將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶,。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,一種改進(jìn)的luciferin面世,,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用,。這種新的底物——fluoroluciferin?;窗矡晒馑孛妇幋a基因D-熒光素鉀鹽做D-熒光素鉀鹽測(cè)試工作液是先用現(xiàn)配,。
熒光素鈉[1],橙紅色粉末,,無氣味,,有吸濕性,;易溶于水,溶液呈黃紅色,,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光,,酸化后消失,中和或堿化后又出現(xiàn),,微溶于乙醇,;比較大吸收波長(zhǎng)(水)?;拘畔⑺幤访Q熒光素鈉拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM來源(分子式)與標(biāo)準(zhǔn)本品為9-(鄰羧基苯基)-6-羥基-3H-噸-3-酮二鈉鹽,。按干燥品計(jì)算,含C20H10Na2O5不得少于,。類別診斷用藥,。劑量滴眼2%溶液貯藏密封保存。制劑熒光素鈉注射液2化學(xué)性質(zhì)編輯中文名稱:熒光素鈉中文別名:熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名稱:FluoresceindisodiumsaltCAS號(hào):518-47-8[2]熒光素鈉分子式:C20H10Na2O5分子量:等級(jí):BSMDL號(hào):MFCD00167039Beilstein號(hào):3833041EC號(hào):208-253-0熒光素鈉[1]3性狀描述編輯本品為橙紅色粉末,;無臭,,幾乎無味;有引濕性,。本品在水中易溶,在乙醇中略溶,。橙紅色粉末,,無氣味,有吸濕性,;易溶于水,,溶液呈黃紅色,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光,,酸化后消失,,中和或堿化后又出現(xiàn),微溶于乙醇,;比較大吸收波長(zhǎng)(水),。4檢查資料編輯氯化物取本品,分取溶液10ml,,依法檢查(附錄ⅧA),,與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液制成的對(duì)照液比較,不得更濃(),。硫酸鹽取上述氯化物項(xiàng)下剩余的溶液25ml,,依法檢查。
這是一種小分子(19kDa)單體酶,,具有獨(dú)特的底物,,其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著***的應(yīng)用前景,為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ),。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征,。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn),,紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測(cè)定相關(guān)的一些挑戰(zhàn),。可將這些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測(cè)量靶蛋白的結(jié)合,,或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè),。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng),,即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?,。該系統(tǒng)由兩部分組成:11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大,更精細(xì)的NanoLuc?亞基,,LgBiT,。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合,重組為一個(gè)明亮的螢光素酶,。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,,從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測(cè)定;也可以和HiBiT一樣高,,從而允許自我組裝,。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究。D-熒光素鉀鹽使用的是什么技術(shù),?
因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,,并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān)。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),,生成氧化熒光素(oxyluciferin),并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,,約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素的半衰期約三個(gè)小時(shí),,只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶,。(1)熒光素不會(huì)影響動(dòng)物的正常生理功能。(2)熒光素是280道爾頓的小分子,,水溶性和脂溶性都非常好,,很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快,,可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi),。腹腔注射擴(kuò)散較慢,,持續(xù)發(fā)光長(zhǎng)。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光,,10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點(diǎn),,在更高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開始衰減,約3h后熒光素排除,,發(fā)光全部消失,,更佳檢測(cè)時(shí)間是在注射后15~35min之間;若進(jìn)行熒光素靜脈注射,,擴(kuò)散快,,但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短??蒲腥藛T根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg,,即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。(4)觀察時(shí)間的間隔沒有更短限制,,只要觀察的條件控制一致就可以,。雖然底物在動(dòng)物體內(nèi)有一定的代謝過程。D-熒光素鉀鹽檢測(cè)公司招代理嗎,?熒光素鈉分子量
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注意事項(xiàng)1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,,以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn),。2)注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間,。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),,盡量避免外源ATP的污染,如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,,在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水,。4)為避免反復(fù)凍融,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化,,如有條件,可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊4妗?)對(duì)于檢測(cè)靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn),,建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品,。6)在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí),應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,,因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性,,此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響,,從而影響檢測(cè)。7)為了您的安全和健康,,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。8)本產(chǎn)品只作科研用途!熒光增白劑pf