可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達,。熒光素酶報告基因有許多優(yōu)點：①非放射性,；②比CAT及其他報告基因速度快；③比CAT靈敏100倍,；④熒光素酶在哺乳細胞中的半衰期為3小時,，在植物中的半衰期為3．5小時,。由于半衰期短，故啟動子的改變會即時導致熒光素酶活性的改變,，而熒光素酶不會積累,。相反,，CAT在哺乳細胞中的半衰期為50小時。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內,，熒光信號強度與酶濃度成正比,。在理想條件下，可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶,。檢測步驟：1．用生物信息學方法分析并預測啟動子區(qū)可能的轉錄因子結合位點,。2．設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中,。3．篩選陽性克隆,，測序。擴增克隆并提純質粒備用,。4．擴增轉錄因子質粒,，提純備用。同時準備相應的空載質粒對照,，提純備用,。5．培養(yǎng)293（或其它目的細胞），并接種于24孔板中,，生長10-24小時（80%匯合度）,。6．將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測,。8．加入底物,，測定熒光素酶的活性。9．計算相對熒光強度,，并與空載對照比較,。D-熒光素鉀鹽應立即使用，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復凍融,。蘇州熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好

    可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進行半衰期為一小時的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標準細胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比,，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同,。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素，產生480nm的藍光,。與螢火蟲螢光素酶類似，海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報告檢測,。Amplite?海腎熒光素酶報告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報告基因檢測試劑盒（#AAT-12535）提供了一種快速,，靈敏的方法，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性,，與海腎螢光素酶相互作用后,，該試劑產生具有強光的產物,。Amplite?海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒特點：該測定法與標準細胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達或基因表達每個試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分各類螢光素酶底物，輔因子和物理特性：近幾十年來,，腺苷三磷酸(ATP)生物發(fā)光技術得到了很大的發(fā)展,，已經在細胞增殖、細胞毒性和生物量計數等方面廣泛應用,。蘇州熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好做D-熒光素鉀鹽測試工作液是先用現配,。

    LAR）Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏,、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕,。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報告基因一起，為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具,。[1]1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)（DLR）DLR是第一種允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑,。通過允許螢光素酶活性的內部歸一化，在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關鍵進展,。此外,，pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+,。這個改造一種報告基因以實現性能改進的例子后來被進一步應用到pGL4和luc2報告基因上,，通過生物信息學和合成方法，實現了更大的改進,。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎上,，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進行一步法“加樣-讀數”檢測的關鍵,。此后,，通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學，例如Bright-Glo?,、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進行檢測,。而“加樣-讀數”的形式簡化了樣品處理。

    按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射,，以小鼠為例,，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內10-15min（待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期）后進行成像分析,。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。注意事項1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）,、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號115144-35-9為準。2）注射方式,、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線，確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間,。3）如果要進行ATP的檢測,，盡量避免外源ATP的污染，如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,，在進行熒光素的溶解時應使用ATP-free無菌水,。4）為避免反復凍融，本產品配制成溶液后建議適當分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化,，如有條件，可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存,。5）對于檢測靈敏度要求特別高的實驗,，建議使用新鮮配制的本產品。6）在進行D-熒光素鉀鹽的溶解時,，應使用無鈣鎂離子的DPBS,，因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響,，從而影響檢測,。7）為了您的安全和健康。D-熒光素也常用于身體的外部研究,。

    后者能夠易溶于水或緩沖液中,，使用方便，溶劑無毒性,，特別適合體內實驗,。配成溶液后的這三種產品，在絕大多數的應用上都沒有實質性的差別,。產品性質運輸和保存運輸條件：4℃冰袋運輸,；短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),，混勻,。立即使用，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復凍融,。2）用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細胞培養(yǎng)基,。4）待圖像分析前,，向細胞內添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min,，然后進行圖像分析,。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復凍融。3）腹腔注射（.）,，按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射,，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g,，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內10-15min（待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期）后進行成像分析。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線,，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。 D-熒光素有時候也叫游離酸。熒光pcr試劑

D-熒光素鉀鹽母液保存條件是-20℃避光,。蘇州熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好

    luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應非常節(jié)省能量,，幾乎所有輸入反應的能量都被轉化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,，只有越10%的能量被轉化為光,，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子,，而是對于所有能夠產生熒光的底物和其對應的酶的統(tǒng)稱,，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應,。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusoleariu'）或許多海洋生物都不相同,。在螢火蟲中,，發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物,，如叩頭蟲,，含有多種不同的熒光素酶，能夠催化同一熒光素底物,，而發(fā)出不同顏色的熒光,。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲）則有更多,，因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學研究很有用,。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyrali'）。應用熒光素酶可以在實驗室中用基因工程的方法生成,，并被用于多種不同的實驗,。蘇州熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好