因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會(huì)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,，并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān),。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,，約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身,。熒光素的半衰期約三個(gè)小時(shí)，只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶,。(1)熒光素不會(huì)影響動(dòng)物的正常生理功能,。(2)熒光素是280道爾頓的小分子，水溶性和脂溶性都非常好,，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障,。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快，可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi),。腹腔注射擴(kuò)散較慢,，持續(xù)發(fā)光長。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光,，10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點(diǎn),，在更高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開始衰減，約3h后熒光素排除,，發(fā)光全部消失,，更佳檢測時(shí)間是在注射后15~35min之間；若進(jìn)行熒光素靜脈注射,，擴(kuò)散快,，但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短?？蒲腥藛T根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg,，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。(4)觀察時(shí)間的間隔沒有更短限制,，只要觀察的條件控制一致就可以,。雖然底物在動(dòng)物體內(nèi)有一定的代謝過程。D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽,。鎮(zhèn)江專業(yè)做D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存

    具體實(shí)驗(yàn)流程：注：該操作流程通常用來檢測轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的活性,，不適用于對細(xì)菌熒光素酶進(jìn)行檢測。1．實(shí)驗(yàn)***天，消化并接種細(xì)胞（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇合適的細(xì)胞）于35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿,，置于5％CO2,、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。2．等細(xì)胞密度達(dá)到70％時(shí)用Luciferase報(bào)告基因質(zhì)粒,、LacZ的表達(dá)質(zhì)粒及其它質(zhì)粒（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)確定）共轉(zhuǎn)染細(xì)胞（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇轉(zhuǎn)染方法,，如磷酸鈣沉淀法、PEI,、lipofectamine2000等均可）,。3．轉(zhuǎn)染24－36h后，吸取培養(yǎng)液,，用預(yù)冷的PBS（無鈣和鎂離子）洗滌細(xì)胞,。注：熒光酶的酶促反應(yīng)會(huì)被痕量的鈣所抑制，故用磷酸鈣轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在收集細(xì)胞前應(yīng)充分洗滌除去含鈣介質(zhì),。4．在每個(gè)培養(yǎng)皿中加入350μl預(yù)冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細(xì)胞,。5．在細(xì)胞裂解期間，準(zhǔn)備足量的ml微量離心管,，將ATPbuffer與luciferinbuffer以1：,，每管100μl。6．依次取等體積的細(xì)胞裂解液（100μl）至步驟5中的離心管中,，迅速混勻,，在發(fā)光儀（Luminometer）上讀取吸光值。注：發(fā)光反應(yīng)會(huì)迅速衰減,，將細(xì)胞裂解液加入反應(yīng)液后5s內(nèi)必須讀取吸光值,。7．確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后。鹽城D-熒光素鉀鹽活題成像D-熒光素鉀鹽檢測公司招代理嗎,？

    5）對于檢測靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn),，建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6）在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí),，應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,，因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會(huì)對熒光素的氧化造成影響,，從而影響檢測,。7）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。8）本產(chǎn)品只作科研用途,！熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱，其中更有代表性的是來自螢火蟲體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類螢光素酶,，分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase,，同時(shí)近年來研究得較多的來源于高斯氏菌的高斯熒光素酶（Gaussluciferase）,。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中,，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence),，可通過熒光測定儀設(shè)備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究,。螢火蟲螢光素酶更通用和更常見的報(bào)告基因是北美螢火蟲photinuspyralis的熒光素酶,，該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度（體內(nèi)）甚至沒有毒性,，可用于原核和真核細(xì)胞,。運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件：4℃冰袋運(yùn)輸,。

    并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測,。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法,。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),，這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力，尤其是在高通量應(yīng)用中,。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺(tái)的誕生,，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,，還可以檢測底物（luciferin）濃度的變化,。通過將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián)，能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測,，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶,。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立，一種改進(jìn)的luciferin面世,，能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測應(yīng)用,。這種新的底物——fluoroluciferin，是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶,。D-熒光素鉀鹽的合作平臺(tái)有哪些,？

    可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比,，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同,。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素，產(chǎn)生480nm的藍(lán)光,。與螢火蟲螢光素酶類似,，海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報(bào)告檢測。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（#AAT-12535）提供了一種快速，靈敏的方法,，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性,，與海腎螢光素酶相互作用后，該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物,。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒特點(diǎn)：該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個(gè)試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分各類螢光素酶底物,，輔因子和物理特性：近幾十年來，腺苷三磷酸(ATP)生物發(fā)光技術(shù)得到了很大的發(fā)展,，已經(jīng)在細(xì)胞增殖,、細(xì)胞毒性和生物量計(jì)數(shù)等方面廣泛應(yīng)用。做D-熒光素鉀鹽測試找哪家公司,？鹽城熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

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    SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應(yīng)用：1）體外化學(xué)發(fā)光分析（invitro）；2）***成像實(shí)驗(yàn)（invivo）,；3）高靈敏度ATP分析,；步驟：Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽，配制成100mM的儲(chǔ)存液（200×,，濃度30mg/ml）,。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存,。2）用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液,，配置工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基,。4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析,。Protocol2：Invivoanalysis/***成像分析1）用無菌的PBS（w/oMg2+,、Ca2+）配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL)，,。一旦使用,，保持冰冷且避光。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物,，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,，尤其是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光（見下圖）,。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性,。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后,，導(dǎo)入研究動(dòng)物如大,、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素,，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強(qiáng)度變化,。鎮(zhèn)江專業(yè)做D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存

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