Q：熒光素酶作為報告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢,？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時具有更寬的動態(tài)范圍,，便于數(shù)值分析比較,，不需要熒光顯微鏡，而且在***實驗中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白,，同時由于沒有內(nèi)源活性,、其本底信號很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進(jìn)行失蹤定位,，并且其觀測不需裂解細(xì)胞，方便進(jìn)行適時觀察,。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比,，相對活性如何？在氧,、鎂和ATP的存在下,，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素,。雙報告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試,。Q：雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炥D(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個方面改善,，首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的,，通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞，另外陽性對照您可以選擇過表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒,，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要,，更好是先酶切驗證。這個實驗檢測結(jié)果很靈敏,，有一定差異是正常的,，通常只要確保它在一個數(shù)量級之內(nèi)即可,。如果差異超出這個范圍可以從兩方面改善，一是記住保持樣本的均一性,。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽,。常州游離酸D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

    產(chǎn)品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,，特別是體內(nèi)***成像技術(shù),。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光,。當(dāng)熒光素過量時,，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,，構(gòu)建原位**模型,，之后注入熒光素底物，通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強度變化,，從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價等,。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征,。注：在抗**藥物藥效評價試驗中,，由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定**大小，受**生長所發(fā)生的**內(nèi)部壞死影響,，生物自發(fā)光并不能很***的評價**生長,，在抗**藥效評價有較高要求的實驗中，建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測**生長,。D-熒光素也常用于體外研究,，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析,；高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸），D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）,。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液?？扇苡诩状己虳MSO,。 徐州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽使用說明D-熒光素鉀鹽檢測公司招代理嗎？

    就可以用高敏感度的CCD相機(jī)對動物體內(nèi)進(jìn)行***觀察而不會傷害到動物本身,。在螢光素酶中加入正確的螢光素底物就可以放出熒光,，而發(fā)出的光子可以被光敏感元件，如螢光探測器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測到,。這就使得對包括***在內(nèi)的多種生命活動進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能,。例如,，螢光素酶已經(jīng)被用于商業(yè)化的次世代焦磷酸定序技術(shù)，借由dNTP接上DNA鏈時水解放出的焦磷酸,，透過另外一個硫酸鹽腺甘酸轉(zhuǎn)移酶反應(yīng),，螢光素酶能將產(chǎn)物ATP與螢光素轉(zhuǎn)化為冷光，機(jī)器借此探測光線并定序,。螢光素酶也可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂,。法醫(yī)可以用含有螢光素酶的溶液來檢測犯罪現(xiàn)場中殘留的血跡。醫(yī)院用螢光素酶的發(fā)光來發(fā)現(xiàn)特定的疾病,。螢光素酶還可以作為“報告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中,，例如，用于在轉(zhuǎn)染過螢光素酶的細(xì)胞中檢測特定啟動子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平,；這一技術(shù)被稱為報告基因檢測法或螢光素酶檢測法（LuciferaseAssay）,。螢光素酶是一個熱敏感蛋白，因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護(hù)能力,。此外,，螢光素酶水母素的發(fā)光強度與環(huán)境中鈣離子濃度相關(guān)，因此可用于檢測生物體內(nèi)的鈣,。

    可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白,。與螢火蟲熒光素酶相比，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同,。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,，產(chǎn)生480nm的藍(lán)光。與螢火蟲螢光素酶類似,，海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報告檢測,。Amplite?海腎熒光素酶報告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報告基因檢測試劑盒（#AAT-12535）提供了一種快速，靈敏的方法,，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性，與海腎螢光素酶相互作用后,，該試劑產(chǎn)生具有強光的產(chǎn)物,。Amplite?海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒特點：該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分各類螢光素酶底物，輔因子和物理特性：近幾十年來,，腺苷三磷酸(ATP)生物發(fā)光技術(shù)得到了很大的發(fā)展,，已經(jīng)在細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和生物量計數(shù)等方面廣泛應(yīng)用,。D-熒光素鉀鹽使用的注意事項,。

    具體實驗流程：注：該操作流程通常用來檢測轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的活性，不適用于對細(xì)菌熒光素酶進(jìn)行檢測,。1．實驗***天,，消化并接種細(xì)胞（根據(jù)具體實驗選擇合適的細(xì)胞）于35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿,，置于5％CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜,。2．等細(xì)胞密度達(dá)到70％時用Luciferase報告基因質(zhì)粒,、LacZ的表達(dá)質(zhì)粒及其它質(zhì)粒（根據(jù)具體實驗確定）共轉(zhuǎn)染細(xì)胞（根據(jù)具體實驗選擇轉(zhuǎn)染方法，如磷酸鈣沉淀法,、PEI,、lipofectamine2000等均可）。3．轉(zhuǎn)染24－36h后,，吸取培養(yǎng)液,，用預(yù)冷的PBS（無鈣和鎂離子）洗滌細(xì)胞。注：熒光酶的酶促反應(yīng)會被痕量的鈣所抑制,，故用磷酸鈣轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在收集細(xì)胞前應(yīng)充分洗滌除去含鈣介質(zhì),。4．在每個培養(yǎng)皿中加入350μl預(yù)冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細(xì)胞。5．在細(xì)胞裂解期間,，準(zhǔn)備足量的ml微量離心管,，將ATPbuffer與luciferinbuffer以1：，每管100μl,。6．依次取等體積的細(xì)胞裂解液（100μl）至步驟5中的離心管中,，迅速混勻，在發(fā)光儀（Luminometer）上讀取吸光值,。注：發(fā)光反應(yīng)會迅速衰減,，將細(xì)胞裂解液加入反應(yīng)液后5s內(nèi)必須讀取吸光值。7．確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后,。南京D-熒光素鉀鹽測試公司哪家便宜,。連云港D-熒光素鉀鹽哪家好

D-熒光素鉀鹽長期保存條件是-20℃干燥避光。常州游離酸D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

    2）按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液,；3）腹腔注射10-15min后進(jìn)行成像分析,。（對每只動物模型做熒光素動力學(xué)研究以確定峰值信號獲取時間）Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外觀：白色至淺黃色粉末溶解：，形成近乎無色至淺黃色的清夜保存：-15°C避光應(yīng)用：1）活細(xì)胞,、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析,；2）***用于報告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究,，包括熒光素酶和ATP水平分析,；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸）,，D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,，可溶于甲醇和DMSO,；后者易溶于水或緩沖液中，使用方便,，溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性,，特別適合體內(nèi)實驗。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別,。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二。常州游離酸D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

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