8．取剩余裂解液測定LacZ的活性,，其讀數(shù)作為內(nèi)標(biāo)用以矯正熒光素酶的讀數(shù)。9.用矯正后的讀數(shù)作圖,，分析數(shù)據(jù),。注：熒光素見光易氧化，已稀釋未用的熒光素應(yīng)丟棄,。注意事項：1．熒光素酶檢測試劑需在15-25℃條件下預(yù)平衡后再進(jìn)行反應(yīng),，而后依據(jù)具體條件進(jìn)行自動或手動檢測。當(dāng)用液閃計數(shù)儀時,，加入熒光素酶檢測試劑后立即輕輕混勻,。2．如果細(xì)胞裂解后不能立即對提取物進(jìn)行檢測，樣品可以在冰上保存大約5h,，在-70℃可保存數(shù)月,。不要反復(fù)凍融以避免酶活性的降低。3．利用上述方法檢測冷的樣品時,，其信號強(qiáng)度將下降5-15%,。4．在熒光素酶活性較高的情況下，導(dǎo)致信號超出線性范圍（信號溢出）可用裂解液將樣品進(jìn)行稀釋,。5．不要儲存稀釋過的樣品,。如果必須保存，要在稀釋的樣品中加入BSA至終濃度為，這樣可以保持樣品的穩(wěn)定性,。6．一些熒光儀在進(jìn)行檢測前需要1-2s的穩(wěn)定,，因此建議在開機(jī)后過一段時間再進(jìn)行檢測操作。熒光素酶報告基因檢測主要有哪些用途,？a.啟動子結(jié)構(gòu)分析,，將啟動子區(qū)域序列（通常2k左右）進(jìn)行分段截短，或?qū)μ囟ㄎ稽c進(jìn)行突變,，再分別構(gòu)建入luciferase報告載體,，檢測其啟動子活性。b.啟動子SNP分析,，一些基因的啟動子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性,。做D-熒光素鉀鹽測試價格是多少。揚(yáng)州D-熒光素鉀鹽活題成像原理

    在食品衛(wèi)生領(lǐng)域由于ATP生物發(fā)光技術(shù)無需培養(yǎng)過程,，操作簡便,、靈敏度高，數(shù)分鐘內(nèi)可得到結(jié)果,，具有其它微生物檢測方法無法比擬的優(yōu)勢,，是目前檢測微生物更快的方法。熒光素是更受歡迎的多功能生物熒光底物之一,。在螢火蟲和幾種其它甲蟲中發(fā)現(xiàn)了螢火蟲熒光酶/熒光素,。通過中間體dioxetanone介導(dǎo)作用，熒光素酶氧化ATPji活的熒光素,。螢火蟲熒光素酶在ATP的輔助下氧化熒光素產(chǎn)生熒光,。這個反應(yīng)發(fā)生的幾秒內(nèi)在560nm處的化學(xué)熒光達(dá)到更高峰，當(dāng)熒光素和ATP都超量存在的條件下,，發(fā)射光與熒光素酶的活性成比例關(guān)系,。螢火蟲熒光素酶很早以前就用于與抗體結(jié)合形成偶聯(lián)物，作為免疫分析中用熒光素作為底物進(jìn)行檢測的標(biāo)簽,。與HRP和堿性磷酸酶相比,，熒光素酶不耐化學(xué)修飾。這個酶的一個特殊的優(yōu)點是,，除了高靈敏度外,，在哺乳動物組織中內(nèi)源性熒光素酶的活性很低。熒光素酶另一個重要的作用是用于衛(wèi)生監(jiān)測,。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測污染,，因為產(chǎn)生熒光所需的ATP存在于所以活ti生物中。這種類型的ATP生物熒光特性足以保證對食品表面的檢測,，無論是在加工制作工程中設(shè)備的污染還是產(chǎn)品的污染都能檢出,。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物,。宿遷專業(yè)做D-熒光素鉀鹽濃度做D-熒光素鉀鹽測試真的靠譜嗎？

    具體實驗流程：注：該操作流程通常用來檢測轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的活性,，不適用于對細(xì)菌熒光素酶進(jìn)行檢測,。1．實驗***天，消化并接種細(xì)胞（根據(jù)具體實驗選擇合適的細(xì)胞）于35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿,，置于5％CO2,、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。2．等細(xì)胞密度達(dá)到70％時用Luciferase報告基因質(zhì)粒,、LacZ的表達(dá)質(zhì)粒及其它質(zhì)粒（根據(jù)具體實驗確定）共轉(zhuǎn)染細(xì)胞（根據(jù)具體實驗選擇轉(zhuǎn)染方法,，如磷酸鈣沉淀法、PEI,、lipofectamine2000等均可）,。3．轉(zhuǎn)染24－36h后，吸取培養(yǎng)液,，用預(yù)冷的PBS（無鈣和鎂離子）洗滌細(xì)胞,。注：熒光酶的酶促反應(yīng)會被痕量的鈣所抑制，故用磷酸鈣轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在收集細(xì)胞前應(yīng)充分洗滌除去含鈣介質(zhì),。4．在每個培養(yǎng)皿中加入350μl預(yù)冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細(xì)胞,。5．在細(xì)胞裂解期間，準(zhǔn)備足量的ml微量離心管,，將ATPbuffer與luciferinbuffer以1：,，每管100μl,。6．依次取等體積的細(xì)胞裂解液（100μl）至步驟5中的離心管中,，迅速混勻，在發(fā)光儀（Luminometer）上讀取吸光值,。注：發(fā)光反應(yīng)會迅速衰減,，將細(xì)胞裂解液加入反應(yīng)液后5s內(nèi)必須讀取吸光值。7．確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后,。

    而發(fā)出不同顏色的熒光,。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲,、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多,，因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）,。熒光素酶報告基因（Luc）是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng),。熒光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中,，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence),。熒光素酶是能夠催化不同底物氧化發(fā)光的一類酶,，哺乳細(xì)胞無內(nèi)源性熒光素酶。更常用的熒光素酶有細(xì)菌熒光素酶,、螢火蟲熒光素酶和Renilla熒光素酶,。細(xì)菌熒光素酶對熱敏感，因此在哺乳細(xì)胞的應(yīng)用中受到限制,。螢火蟲熒光素酶靈敏度高,，檢測線性范圍寬達(dá)7～8個數(shù)量級，是更常用于哺乳細(xì)胞的報道基因,，用熒光比色計即可檢測酶活性,，因而適用于高通量篩選。隨著具有膜通透性和光裂解作用的螢火蟲熒光素酶的應(yīng)用,，無需裂解細(xì)胞即可檢測酶活性,。Renilla熒光素酶催化腸腔（coelenterazine）氧化，產(chǎn)物可透過生物膜,，可能是更適用于活細(xì)胞的報告分子,。將熒光素酶報告基因載體轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。D-熒光素鉀鹽長期保存條件是-20℃干燥避光,。

    D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品,。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,，特別是體內(nèi)活題成像技術(shù),。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光,。當(dāng)熒光素過量時,，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,，構(gòu)建原位腫大的瘤模型,，之后注入熒光素底物，通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強(qiáng)度變化,，從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價等,。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征,。注：在抗腫大的瘤藥物藥效評價試驗中,，由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定腫大的瘤大小，受腫大的瘤生長所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響,，生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評價腫大的瘤生長,，在抗腫大的瘤藥效評價有較高要求的實驗中，建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長,。D-熒光素也常用于體外研究,。D-熒光素鉀鹽測試需要哪些必備條件,？鹽城螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽公司

D-熒光素鉀鹽的活題成像技術(shù)。揚(yáng)州D-熒光素鉀鹽活題成像原理

    可運(yùn)用熒光素酶報告系統(tǒng)分析其相對活性,。c.驗證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用,，將該序列（通常為啟動子區(qū)域）插入報告基因載體，同時在實驗細(xì)胞***轉(zhuǎn)過表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子,，可分析轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)是否提高熒光素酶活性,。d.可以分析信號通路是否***，將該信號通路的下游響應(yīng)原件序列構(gòu)建入報告基因載體,，在不同上游信號條件下,，熒光素酶活性**了通路的下游響應(yīng)。例如在GPCR研究中,，將cAMPresponseelement（CRE）載入報告基因載體,，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株后，可以用于分析GPRC的***與6b7a976f-99ae-4c48-8159-4bd篩選,。又如,，將HIF1α的響應(yīng)原件hypoxia-responsiveelement(HRE)插入luciferase報告載體構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，可以用于低氧相關(guān)通路的研究,。e.驗證microRNA的靶序列,，將待測的3’UTR序列插入報告基因載體，再共轉(zhuǎn)入該microRNA,，如果熒光素酶活性下降,，則提示為其靶序列。Q：在[信諾金達(dá)]做熒光素酶報告基因檢測,，需要提供什么,？實驗結(jié)果包括哪些？您需要提供：1.基因序列或模板,，需提供詳細(xì)的轉(zhuǎn)錄因子,、目的基因或microRNA信息,；2.實驗細(xì)胞,，[信諾金達(dá)]默認(rèn)為使用293T細(xì)胞，實驗結(jié)束后,，[信諾金達(dá)]會為您提供實驗流程及完整報告一份,，包括實驗原始數(shù)據(jù)、圖片,、分析結(jié)果等,。揚(yáng)州D-熒光素鉀鹽活題成像原理

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