免疫組化分類中免疫酶標(biāo)方法，英瀚斯生物為您介紹,。免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,，于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,，通過光鏡或電鏡,，對細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究,。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前定位準(zhǔn)確、對比度好,、染色標(biāo)本可長期保存,，適合于光、電鏡研究等,。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速,，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法，目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬***法（過氧化物酶-抗過氧化物酶）,、ABC法（卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物）,、SP法（鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶）、即用型二步法（聚合物鏈接）等,。臨床樣本檢測,，免疫組化，英瀚斯生物專業(yè)病理,。湖南組織免疫組化檢測

免疫組化的結(jié)果分析：

免疫組化實(shí)驗(yàn)通常需要設(shè)置陽性對照、陰性對照（或替代對照）（陽性對照是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無問題,；陰性對照與替代對照是排除有無非特異性染色）,。一般情況下，陽性對照顏色的特點(diǎn)為：Ag定位,，包漿,、胞核、胞膜,、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性,。且染色的強(qiáng)度不同（顏色深淺不一）；陰性對照的特點(diǎn)為：染色細(xì)胞與組織無區(qū)別,，顏色具有彌散性,，分布均勻。

英瀚斯生物可承接各類病理染色,，包括免疫組化,。

說明：免疫組化實(shí)驗(yàn)可以對結(jié)果進(jìn)行定量分析，但要實(shí)驗(yàn)得到的必須是高質(zhì)量的染色切片,，要求背景染色淺且特異性染色較深,，這樣分析的結(jié)果才會比較準(zhǔn)確。 福建動物組織免疫組化推薦做免疫組化需要多少錢,？

實(shí)驗(yàn)失敗常見問題分析有哪些：

為什么在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陰性,？

答：這種現(xiàn)象主要是由操作不當(dāng)導(dǎo)致，可能的原因有：1.染色操作不當(dāng),，致使染色失??；2.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性；3.緩沖液中有疊氮化鈉,，抑制了酶的活性,；4.復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)?shù)取＝ㄗh逐一排查,，找到原因后重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陽性，這是為什么,？答：與上一個(gè)問題類似,，出現(xiàn)的原因也是試驗(yàn)操作存在問題，可能的原因有：1.切片在染色過程中抗體過濃,，或者干片了,；使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應(yīng)時(shí)間過長；3.抗體溫育的時(shí)間過長等,。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)切片的背景很深,，這是為什么？答：以下幾方面會導(dǎo)致切片的背景過深：1.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血,，造成抗體的非特異性反應(yīng),；2.內(nèi)源性過氧化酶沒有完全阻斷，顯色過程中過氧化酶與酶底物反應(yīng),，造成背景,；3.底物呈色反應(yīng)時(shí)間過長或呈色反應(yīng)后漂洗不徹底。

病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說的一句話應(yīng)該就是“做個(gè)免疫組化吧”,；不管是臨床醫(yī)師,，還是患者，他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化,？”病理醫(yī)師通過“特殊染色”來進(jìn)行細(xì)胞的識別,。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同、則化學(xué)性質(zhì)不同,，通過染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色,。不過，由于組織固定或儲存等,，會造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失,，因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展,，根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì),，則有了現(xiàn)在免疫組化的方法：不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異,，抗體與被測組織中的特定抗原結(jié)合,，進(jìn)而通過一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來,。如有相應(yīng)顯色，則證實(shí)可能有被測抗原,；無顯色則可能無被測抗原,。當(dāng)然，這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”,，如抗體的非特異性結(jié)合,、非特異性顯色，則容易造成“假陽性”,；或者雖有相關(guān)抗原,、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等，則容易造成“假陰性”,。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的增加,，這些問題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免，前者如各種顯色方法的優(yōu)化,；后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化,、新型抗體開發(fā)及選擇。病理報(bào)告中的免疫組化到底有什么作用?

免疫組化結(jié)果背景染色較深的原因有哪些,？

 （1）抗體濃度過高：一抗?jié)舛冗^高是常見的原因之一,。解決辦法是，每次使用新抗體前應(yīng)當(dāng)對其工作濃度進(jìn)行測試,，使每一抗體個(gè)體化，找到適合自己實(shí)驗(yàn)室的理想工作濃度,，既使是即用型的抗體也應(yīng)如此,，不能只簡單的按說明書進(jìn)行染色。

（2）抗體孵育時(shí)間過長或溫度較高：解決辦法是,，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程,，比較好隨身佩帶報(bào)時(shí)表或報(bào)時(shí)鐘，及時(shí)提醒,，避免因遺忘而造成時(shí)間延長?，F(xiàn)在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的時(shí)間不是傳統(tǒng)的1小時(shí),，而是30分鐘,，因此，要根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行調(diào)整,。 

（3）DAB變質(zhì)和顯色時(shí)間太長：DAB比較好現(xiàn)用現(xiàn)配,，如有沉渣應(yīng)進(jìn)行過濾后再用。配制好的DAB不應(yīng)存放時(shí)間太長,，因?yàn)樵跊]有酶的情況下,，過氧化氫也會游離出氧原子與DAB產(chǎn)生反應(yīng)而降低DAB的效力,，未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節(jié)約的辦法是不可取的。DAB的顯色比較好在顯微鏡下監(jiān)控,，達(dá)到理想的染色程度時(shí)立即終止反應(yīng),。但是當(dāng)染**太多時(shí)或用染色機(jī)時(shí)，這樣做似乎不現(xiàn)實(shí),，但至少應(yīng)對一些新的或少用的抗體顯色時(shí)進(jìn)行監(jiān)控,，避免顯色時(shí)間過長。

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免疫組化應(yīng)該選擇石蠟切片還是冰凍切片,？ 

（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,，這是***我向一老師請教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片,，可能會破壞組織的抗原性,，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片,；但是要求做石蠟切片的,，可作冰凍切片。

（2）冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,，做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步,。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，可能會使抗原彌散,；切片厚度較石蠟的厚,，做的片子沒石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時(shí),，目錄上都寫著做什么樣的切片,，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟,，如寫著兩者都可,，那就都能做。

（3）石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),，且容易存放在室溫,，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來做原位雜交的的切片,，為了防止RNA降解,，保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,，容易成功，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好,。

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