免疫組化應該選擇石蠟切片還是冰凍切片,？ 

（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是***我向一老師請教得出的結論。因為作石蠟切片時要高溫烤片,，可能會破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定,，則可作石蠟切片,；但是要求做石蠟切片的,，可作冰凍切片。

（2）冰凍切片的優(yōu)點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,，做免疫組化時不需抗原修復這一步,。缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構，可能會使抗原彌散,；切片厚度較石蠟的厚,，做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時,，目錄上都寫著做什么樣的切片,，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟,，如寫著兩者都可,，那就都能做。

（3）石蠟切片的優(yōu)點可以保持組織細胞的形態(tài)結構,，且容易存放在室溫,，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中,，尤其是用來做原位雜交的的切片,，為了防止RNA降解，保存一貫很重要,。由于石蠟切片可以切到4微米左右,，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功,，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好,。

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關于免疫組化的封閉：用和二抗來源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min,，然后甩去封閉用血清,，勿洗；注意：封閉時間根據(jù)具體實驗調整,；封閉液一般選用5%BSA或與二抗來源一致的血清,，切記是BSA，不是PBS.很多論壇寫的是PBS,太坑了,。①使用血清好還是BSA好,？答：***是待檢樣本會非特異性的和蛋白結合，從而導致背景過高,，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結合,，從這點看,，BSA和血清沒有明顯區(qū)別。第二是待檢樣本中可能會有Fc受體,，可以和抗體恒定區(qū)結合,，與抗體特異性無關，封閉血清中有抗體,，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結合,。BSA則無法封閉Fc受體。做得好的免疫組化是什么動物,、細胞的免疫組化,、免疫熒光，就找英瀚斯生物,！

免疫組化實驗所用的組織和細胞標本是什么樣的,？

實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片,，后者包括組織印片,、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本**常用,、**基本的方法,，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片,，有利于各種染色對照觀察,；還能長期存檔，供回顧性研究,；石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響,，但可進行抗原修復，是免疫組化中優(yōu)先的組織標本制作方法,。

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免疫組化的抗原修復

很多抗原的可視性可以通過抗原修復來提高,，抗原修復可以打破福爾馬林固定時形成的蛋白質交聯(lián)，從而使被掩藏的抗原顯現(xiàn)出來,?？乖迯图夹g包括不同時間長度的加熱或者利用蛋白酶來做酶消化，例如蛋白酶K,，胰蛋白酶或胃蛋白酶,。加熱的方法通常會用到微波爐，高壓鍋,，蒸箱或水浴,。將樣品在接近100°C高溫加熱20分鐘后再冷卻同等的時間,。**常用的抗原修復液有a)檸檬酸鹽緩沖劑,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用檸檬酸鹽緩沖劑做抗原修復：檸檬酸鹽緩沖劑配方:10mM檸檬酸鈉,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM檸檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0將含有檸檬酸鈉或檸檬酸鹽緩沖劑的染色盤放到蒸箱或者水浴中，預熱到95-100°C,。將切片浸沒于染色盤中,。蓋子虛掩，孵育20-40分鐘(研究者需自己決定比較好的孵育時間),。關掉蒸箱或水浴,，將染色盤置于室溫下，讓切片冷卻20分鐘,。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次,，每次2分鐘。開始封閉步驟,。 病理免疫組化多少錢,？

細胞屬性的判定，免疫組化也可以進行這方面的臨床應用,。通過特定抗體標記出細胞內相應的抗原成分,，來判定細胞的屬性，確定cancer的來源,。如細胞角蛋白(CK)是上皮性標記,，CK陽性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質纖維酸性蛋白(GFAP)陽性則提示膠質cancer;CD20和CD79a陽性則提示B細胞淋巴瘤;平滑肌肌動蛋白(Actin)陽性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽性;血管源性cancer中內皮細胞標記物CD34陽性等等。如果您需要做實驗外包,，可以與我們英瀚斯生物進行聯(lián)系,。英瀚斯生物，專業(yè)承接免疫組化等各類病理染色檢測,！四川靠譜免疫組化多少錢

免疫組化技術的原理,、分類和優(yōu)點！青海病理免疫組化哪家好

在臨床應用中,，免疫組化還可以進一步分類不同qi官與組織交界處cancer,。由于重疊的特征，在一些組織qi官交界處的cancer,，只憑組織學基礎對cancer進行分類很困難,。如胃腸道梭形細胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤，是間質起源的胃腸道間質瘤(GIST),，還是神經(jīng)起源的神經(jīng)鞘瘤;同樣發(fā)生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細胞cancer,，兩者較難區(qū)別，且醫(yī)療與預后明顯的不同,，但用免疫組化檢測角蛋白就較易于區(qū)別:角蛋白陰性則為精原細胞cancer,，而角蛋白陽性則為胚胎cancer。青海病理免疫組化哪家好

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