外泌體可通過流式、WB(檢測指標有CD9,CD63,CD81),、電鏡觀察,、NTA粒徑追蹤等手段檢測,普遍應(yīng)用于藥物載體,、疾病診斷marker,、精細醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,,樣本含量低,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心,、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等,。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量,、純度以及生物活性,。外泌體是細胞間進行物質(zhì)運輸和信息交流的重要工具,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移,。與細菌傳染,幫助細菌逃避免疫關(guān)系很大,,并與心血管疾病,,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系。外泌體的提取,、分離方法:尺寸排阻色譜法和超濾法,。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜
外泌體(Exosome)是細胞主動分泌的囊泡樣小體,大小均一,,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,來源普遍,,幾乎所有細胞都可分泌,,在血液,尿液,,唾液,,腦脊液,,腹水,乳汁等體液中普遍分布,。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中,。1996年,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),,開啟了外泌體蛋白研究的新天地,。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學獎解答了細胞如何組織其內(nèi)部較重要的運輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話外泌體提?。和ㄟ^色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,,這可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu)。
外泌體的提取,、分離方法:開發(fā)高效,、快速、穩(wěn)定,,并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法,,是目前外泌體應(yīng)用于臨床的基礎(chǔ)和前提。從細胞上清和體液中提取分離外泌體的方法很多,,但是外泌體的純度和產(chǎn)量卻和分離方法息息相關(guān),。通常分離步驟少、產(chǎn)率高,,但是純度會受到影響,。鑒于每種分離方法都有其優(yōu)缺點,實驗可以根據(jù)樣本來源,、下游實驗?zāi)康牡?,選擇合適的外泌體分離方法。2015年,,國際囊泡組織(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,,簡單依靠一種分離方法得到的外泌體的純度和產(chǎn)量都難滿足實驗的需求,。因此,,推薦聯(lián)合使用各種方法,從而得到高純度和高產(chǎn)量的外泌體,。
外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),天然存在于血液、尿液,、唾液,、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細胞在內(nèi)幾乎所有類型的細胞(免疫細胞,、神經(jīng)細胞,、干細胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞,,也可運輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA、miRNA,、lncRNA,、circRNA,甚至細胞器進入受體細胞,,參與細胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng),、血管生成,、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用,,不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標記物,也能作為靶向藥物的載體進行疾病,。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,,它可以通過外泌體從一個地方轉(zhuǎn)運到另外一個地方行使基因沉默功能。通過檢測外泌體中miRNA表達變化,,可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能外泌體提?。好芏忍荻入x心。
外泌體的提取,、分離方法:免疫親和層析法,。免疫親和層析法是利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法,,主要用于生物大分子的分離,、純化。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,,如TSG101或四跨膜蛋白,。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合,只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別,這使得提取的外泌體純度高,,但是產(chǎn)量低,。Zarovni等分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法,,從血漿和細胞上清中提取外泌體蛋白,,結(jié)果表明,免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標記蛋白(Alix,、CD9,、CD63),同時,,ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性,。使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,,截留完成后,。濟南正規(guī)外泌體提取試劑直銷價
重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量,。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜
外泌體的提取方法:1,、色譜法。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進行分離的分析的方法,。樣品中大分子不能進入凝膠孔,,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,首先被流動相洗脫出來,;小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞,,在柱中受到更強地滯留,更慢地被洗脫出,。分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍,。2,、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,,大于一般蛋白質(zhì),,利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法,。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜