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外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),天然存在于血液,、尿液,、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,,Exosome可通過細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA,,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答,、炎癥反應(yīng)、血管生成,、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細(xì)胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,,它可以通過外泌體從一個(gè)地方轉(zhuǎn)運(yùn)到另外一個(gè)地方行使基因沉默功能,。通過檢測外泌體中miRNA表達(dá)變化,可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能,。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量,。北京正規(guī)外泌體提取試劑哪家好
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),,1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液,、唾液、尿液,、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,,參與細(xì)胞間通訊,,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。重慶正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商外泌體的提取,、分離方法:超高速離心法。
外泌體的提取的方式:1,、免疫磁珠法,,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高,、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,,不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn),。2、PS親和法,,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,,獲得的外泌體形態(tài)完整,,純度較高。由于不使用變性劑,,不影響外泌體的生物活性,,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),,表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體,。六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,,應(yīng)用不普遍。
外泌體研究的主要應(yīng)用:外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原提呈、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化,、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥,。一些病癥轉(zhuǎn)移,。來自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血病(AML)細(xì)胞的增殖,、遷移和壓制細(xì)胞凋亡,。治病靶標(biāo)。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,,從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞,,以明顯降低RAS活化、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過程,。免疫,。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外,并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細(xì)胞,,有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗,。心血管。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)動脈硬化,。分子標(biāo)記,。疾病診斷。在酒精性肝病,、NASH,、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細(xì)胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升,。預(yù)后標(biāo)志,。首先在無菌條件下提取人體體液,并用PBS緩沖液進(jìn)行稀釋,。
外泌體鑒定:外泌體分離之后,,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,,多角度進(jìn)行鑒定,。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測:外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,,如CD9,、CD63和CD81,;細(xì)胞質(zhì)蛋白,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins),;使用可截留100KD分子量的膜,,通過離心截留上清中的外泌體,截留完成后,。外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:純化和富集的完整血漿/血清,,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體可用于功能研究。珠海正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商
外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:無需蛋白酶處理,。北京正規(guī)外泌體提取試劑哪家好
精細(xì)化學(xué)品行業(yè)的傳統(tǒng)領(lǐng)域主要包括原代細(xì)胞,,無血清細(xì)胞凍存液,干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,,動物疾病模型等領(lǐng)域,。經(jīng)過長期積累,我國精細(xì)化工行業(yè)在傳統(tǒng)領(lǐng)域已經(jīng)基本滿足了國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展的需要,,部分產(chǎn)品已具有一定的國際競爭力,,染料、農(nóng)藥的產(chǎn)量已在全球居首,,涂料產(chǎn)量已達(dá)到全球第四位,。隨著社會經(jīng)濟(jì)的進(jìn)一步發(fā)展,人們對原代細(xì)胞,,無血清細(xì)胞凍存液,,干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,動物疾病模型的需求將進(jìn)一步上升,,電子與信息化學(xué)品,、表面工程化學(xué)品、醫(yī)藥化學(xué)品等將得到進(jìn)一步的發(fā)展,,全球范圍內(nèi)精細(xì)化學(xué)品市場規(guī)模將保持高于傳統(tǒng)化工行業(yè)的速度飛速增長,。精細(xì)化工中間體產(chǎn)品專業(yè)性強(qiáng),需要建立特定銷售渠道,,能否與客戶保持長期業(yè)務(wù)合作,,將對生產(chǎn)型企業(yè)日常經(jīng)營和長遠(yuǎn)發(fā)展構(gòu)成重大影響。精細(xì)化工中間體的質(zhì)量和純度直接影響到終端產(chǎn)品的性能和品質(zhì),。隨著我國環(huán)境保護(hù)政策,、安全生產(chǎn)政策和職工福利政策的日益完善,以及美歐等發(fā)達(dá)家對精細(xì)化學(xué)品中間體進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)的日益嚴(yán)格,,精細(xì)化工中間體行業(yè)的準(zhǔn)入門檻越來越高,,這些都需要精細(xì)化工中間體生產(chǎn)商在環(huán)保、安全,、產(chǎn)品研發(fā)和經(jīng)營規(guī)模等方面進(jìn)行較大的加入,,導(dǎo)致其初始及持續(xù)加入不斷攀升,。北京正規(guī)外泌體提取試劑哪家好