外泌體的提取方法學規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等,。關(guān)于外泌體的提取有超速離心,、試劑盒,、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,，然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法，由于離心步驟繁瑣,，費事費力,，而且步驟多導致實驗中容易污染，且損耗量大,，使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對于抽提細胞上清來說，更是極為不請便,，試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,，無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀，都具有操作極其不便的缺點,，總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔，造成濃縮效率低,，濃縮管重復(fù)利用差,，甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團，造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,，對于后續(xù)實驗也有影響近年來,，隨著人們對外泌體的研究和認識加深。重慶正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

研究中研究人員發(fā)現(xiàn),，胃病細胞周圍富含TAM,。TAM以M2極化表型為特征,，并促進胃病細胞在體外和體內(nèi)的遷移,。此外，研究人員發(fā)現(xiàn)M2衍生的外泌體決定了TAMs介導的遷移活動,。通過使用質(zhì)譜方法,，研究人員確定載脂蛋白E（ApoE）是M2巨噬細胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質(zhì)。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來源于M2外泌體的蛋白質(zhì),，是決定胃病細胞遷移潛力的主要驅(qū)動因素,。然而，來自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細胞的外泌體在體外和體內(nèi)對胃病細胞的遷移沒有顯著影響,。在機制上,，M2巨噬細胞衍生的外泌體介導ApoE啟動的PI3K-Akt信號通路,，并在TAM和受體胃病細胞之間進行細胞間轉(zhuǎn)移，促進細胞骨架的遷移,?？偟膩碚f，該研究發(fā)現(xiàn)外泌體介導的功能性ApoE蛋白從TAM轉(zhuǎn)移到一些病癥細胞,，促進了胃病細胞的遷移,。南京外泌體提取試劑價格外泌體的提取分離：超濾離心。

外泌體的提取方法：1,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白）,，用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗，難以普遍普及,。2,、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物,，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,。

外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷：miRNAs是一類含有20～25個核苷酸的非編碼小RNA,，能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達，目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中,，參與一些病癥的形成和演化過程,。單個miRNA可能通過壓制性復(fù)合物與多個mRNA結(jié)合，從而阻滯整個生物通路,。因此,，外泌體的miRNA具有成為NSCLC標志物的優(yōu)勢,。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環(huán)游離miRNA的表達，與75例健康者相比,，發(fā)現(xiàn)了兩種高表達的miRNA（miR-25和miR-223）,。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個miRNA的表達進行了評估，結(jié)果顯示,，12個一些病癥相關(guān)的miRNA*在肺病患者中過度表達,。Cazzoli等收集了30個血漿樣本，發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA（miR-378a,、-379a,、-139-5p、-200b-5p）在肺病患者血清中明顯升高,，用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積（AUC）為0.908,。離心除去細胞器，留取上清,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質(zhì)。

外泌體鑒定：參與生物功能的分子,，如凋亡轉(zhuǎn)接基因2互作蛋白X（ALIX）,、一些病癥易感基因101蛋白（TSG101）、熱休克蛋白（HSP70,、HSP90）,，以及細胞分泌的特異性蛋白。外泌體高通量檢測,。外泌體內(nèi)含有與細胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)和核酸,，可以運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA,、miRNA,、lncRNA、circRNA等進入受體細胞,，參與細胞間通訊,。不同細胞來源的外泌體所含有的蛋白成分和RNA不太相同，可作為多種疾病的早期診斷標記物,，也能作為靶向藥物的載體進行疾病治病,。高通量測序。2.mRNA高通量測序,。芯片（人、小鼠）,。芯片（人,、小鼠）,。5.蛋白質(zhì)組分析（iTRAQ、TMT,、Label-free）,。外泌體提取：磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點。重慶正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

外泌體的提取,、分離方法：開發(fā)高效,、快速、穩(wěn)定,，并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

外泌體的提取、分離方法：梯度密度離心法,。研究發(fā)現(xiàn),，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間，因此,，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合，原理是先除去非囊泡物質(zhì),，再通過梯度密度濃縮提取外泌體,，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,，但是2012年,，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡，因此,，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體,。如果離心時間不充足，污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,，特別是這個密度范圍又比較寬,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦