無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液細(xì)胞冷凍保存方法：選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中,。2.按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù),。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量,，置于離心管中,，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃,，3~5min）,。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無(wú)血清型細(xì)胞凍存液于離心管中,，使細(xì)胞濃度為5×105至5×106cells/ml,。緩慢地混合均勻，制成細(xì)胞混合液,。5.將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中,。6.直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱，長(zhǎng)期冷凍保存,。7.若研究者需要液氮保存時(shí),，可將完全凍結(jié)的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐,。血清批次、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異,。無(wú)錫無(wú)血清細(xì)胞凍存液報(bào)價(jià)

細(xì)胞凍存,，我們應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)：1、液氮內(nèi)的細(xì)胞凍存較長(zhǎng)時(shí)間不要超過(guò)半年,，凍存在液氮中的細(xì)胞應(yīng)一段時(shí)間內(nèi)進(jìn)行更替,。一個(gè)細(xì)胞系在培養(yǎng)一個(gè)月后，可復(fù)蘇一管新的細(xì)胞確保其質(zhì)量沒(méi)有發(fā)生太大變化,，傳代幾次后,，再凍存留種。2,、細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，為保證獲得較高的存活率和接種率,，應(yīng)盡可能的快速完成復(fù)蘇,，以避免在升溫過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生。書(shū)面介紹的復(fù)蘇溫度是37℃-42℃,，但是本人在實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)40℃環(huán)境下復(fù)蘇效果較好,。3.復(fù)蘇時(shí)使用的培養(yǎng)基和凍存時(shí)使用的培養(yǎng)基中的血清盡量保證同一批次。蕪湖無(wú)血清細(xì)胞凍存液無(wú)血清凍存液特性：不需回溫,，完全即用型,。

無(wú)血清細(xì)胞凍存液與傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液比較及優(yōu)勢(shì)：1.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液只適用于含血清細(xì)胞的凍存，但并不適用于無(wú)血清培養(yǎng)的細(xì)胞,，例如一些CIK細(xì)胞等,，而無(wú)血清細(xì)胞凍存液即適用于含血清細(xì)胞的凍存，又適用于無(wú)血清細(xì)胞的凍存,，是一種通用型細(xì)胞凍存液,，通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株；2.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液含10%胎牛血清,，因血清是動(dòng)物源性成份,，因此病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)很高,，而無(wú)血清細(xì)胞凍存液因不含血清,，只含DMSO、葡萄糖等營(yíng)養(yǎng)成份,，較大降低了動(dòng)物血清來(lái)源病毒,、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)，確保凍存細(xì)胞的安全,；3.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液含血清,，但動(dòng)物血清成分復(fù)雜,，個(gè)體差異大，且生產(chǎn)來(lái)源不穩(wěn)定,，因此批次間質(zhì)量常常不穩(wěn)定,，這導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)也會(huì)受到影響，而無(wú)血清細(xì)胞凍存液成分和配比明確,，批次間差異很小,，能夠保證生長(zhǎng)細(xì)胞狀態(tài)的穩(wěn)定性，細(xì)胞存活率高,。

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,，起到了細(xì)胞保種的作用,。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買(mǎi),、寄贈(zèng),、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),，可使溶液冰點(diǎn)降低,，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出,，減少了冰晶形成,，從而避免細(xì)胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活,。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開(kāi)始為-1到-2℃/min,，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。無(wú)血清細(xì)胞凍存液不含牛血清,，無(wú)動(dòng)物源組份。

細(xì)胞凍存步驟說(shuō)明：配制含10%DMSO或甘油,、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗,。去除PBS,，加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái);離心1000rpm，5min;去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)存液中細(xì)胞的較終密度為5×106/ml~1×107/ml;將細(xì)胞分裝入凍存管中,，每管1~1.5ml;在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,，凍存時(shí)間及操作者;凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi)。無(wú)血清凍存液注意事項(xiàng)：請(qǐng)選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行凍存,。開(kāi)封無(wú)血清細(xì)胞凍存液價(jià)格

無(wú)血清細(xì)胞凍存液：降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,，減少陽(yáng)離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量。無(wú)錫無(wú)血清細(xì)胞凍存液報(bào)價(jià)

使用方法：1)細(xì)胞超凈臺(tái)無(wú)菌環(huán)境,，1.5mlEP管內(nèi)加入細(xì)胞混懸劑均勻混懸細(xì)胞,，細(xì)胞終濃度為5×106個(gè)/ml，混懸液體積為200μl,。細(xì)胞凍存劑冰水混合物中預(yù)冷，逐滴加入細(xì)胞凍存劑800μl,，細(xì)胞混懸劑與細(xì)胞凍存劑的體積比控制在1:4,。2)開(kāi)啟程序性降溫，降溫速率為1℃/min,，較后降溫至-80℃以下進(jìn)行凍存,。將比較例1凍存后細(xì)胞的復(fù)蘇率與實(shí)施例5凍存后細(xì)胞的復(fù)蘇率進(jìn)行對(duì)比，具體結(jié)果如附圖1所示,，可見(jiàn)采用本發(fā)明的凍存方法能夠明顯提高細(xì)胞的復(fù)蘇率,。其他實(shí)施例通過(guò)與比較例1進(jìn)行比較，也得到相同的試驗(yàn)結(jié)果,。本發(fā)明的凍存方法不僅可以明顯提高凍存后細(xì)胞復(fù)蘇率,，同時(shí)還可減少不同批次細(xì)胞凍存復(fù)蘇率不穩(wěn)定、以及避免由血清中的支原體,，細(xì)菌,，朊細(xì)菌及其他細(xì)菌顆粒引發(fā)的污染。無(wú)錫無(wú)血清細(xì)胞凍存液報(bào)價(jià)