總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑,。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,,顏色鮮明,便于分層,。本試劑適用范圍普遍,,可以從動(dòng)物組織,、植物材料,、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA,。該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠較大限度地保證RNA的完整性,。在加入氯仿離心后,,溶液會(huì)分成三層:上層無(wú)色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相,,RNA分布在上清層中,。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA,。提取的總RNA完整性好,無(wú)蛋白和DNA污染,,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),,如RT-PCR、Real-timeRT-PCR,、Northernblot,、DotBlot、體外翻譯等,。血漿/血清RNA提取試劑盒:該試劑盒中的裂解液P1及柱結(jié)合液P2具有高效裂解及提取效果,。蕪湖開(kāi)封RNA提取試劑
RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性,。無(wú)論是人,、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織,,該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果,。TRIpure試劑操作上的簡(jiǎn)單性允許同時(shí)處理多個(gè)樣品,所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成,。TRIpure抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染,,故而能夠作RNA印跡分析,、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+選擇,、體外翻譯,、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆等。和進(jìn)口品牌實(shí)驗(yàn)對(duì)照顯示,,公司的產(chǎn)品質(zhì)量已經(jīng)達(dá)到甚至超過(guò)了進(jìn)口產(chǎn)品的質(zhì)量~上海唐山RNA提取試劑RNA提取試劑注意事項(xiàng):有機(jī)相用異丙醇沉淀可回收蛋白,。
組成性非編碼RNA。tRNA是具有復(fù)雜的倒“L”型的多功能小分子,,他的主要功能是活化專一的氨基酸并攜帶氨基酸參與蛋白質(zhì)生物合成,。隨著科技進(jìn)步,人們可以設(shè)計(jì)生產(chǎn)出一種tRNA類似物,,創(chuàng)造了新的生物技術(shù)的應(yīng)用,。(1)tRNA類似物??衫梅翘烊坏膖RNA類似物作為體內(nèi)應(yīng)用藥物,,特別是針對(duì)病原體的蛋白液合成系統(tǒng)。(2)tRNA介導(dǎo)蛋白質(zhì)工程(TRAMPE),。傳統(tǒng)的遺傳工程由于只能操作蛋白質(zhì)中常見(jiàn)的20種天然氨基酸而受到限制,。而tRNA介導(dǎo)的蛋白質(zhì)工程允許拓展遺傳密碼,可以將人為設(shè)計(jì)的非天然氨基酸選擇性地?fù)饺氲鞍踪|(zhì)。在蛋白質(zhì)工程中借助于校正tRNA定點(diǎn)摻入非天然氨基酸可以提供蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息,改進(jìn)蛋白質(zhì)檢測(cè)與分離的方法,甚至賦予蛋白質(zhì)某些新的特性,。隨著生物技術(shù)的發(fā)展和完善,,tRNA介導(dǎo)蛋白質(zhì)工程將不僅在蛋白質(zhì)工程中發(fā)揮潛能,而且在研制新型生物材料和疾病診斷及藥物醫(yī)治方面起到推動(dòng)作用。
常用總RNA提取試劑:異硫氰酸胍法和Trizol法是動(dòng)物組織及動(dòng)物細(xì)胞總RNA提取較常用的方法,,異硫氰酸胍法操作簡(jiǎn)單快捷,,適用于樣本足夠大的常規(guī)動(dòng)物組織;Trizol法裂解能力較強(qiáng),,尤其適合小樣本及特別難提取的組織,,如兔子皮膚,動(dòng)物結(jié)締組織等總RNA的提??;另外Trizol作為一種通用型的裂解試劑,還可以用于植物組織,、細(xì)菌,、菌類等組織的提取。對(duì)于含多糖多酚的植物組織如油茶,、茶葉,、油菜等還可以使用CTAB法進(jìn)行總RNA的提取。提取RNA時(shí)我們經(jīng)常遇到的問(wèn)題是:(1)RNA產(chǎn)量較低,;(2)RNA有嚴(yán)重的鹽類污染,;(3)RNA有嚴(yán)重的有機(jī)溶劑污染,;(4)樣品降解等問(wèn)題。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料,。
RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法:1,、得率過(guò)低:提取樣本過(guò)低總量不足或者提取樣本過(guò)多裂解不徹底;應(yīng)當(dāng)使用適當(dāng)質(zhì)量的組織或細(xì)胞進(jìn)行提取,,樣本前處理一定要做好,,裂解應(yīng)充分。2,、基因組殘留:Trizol法提取時(shí),,分層后吸取上清時(shí)吸到中間層會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的基因組污染;分層吸取時(shí)應(yīng)當(dāng)格外小心,,不要吸取到中間層,。如果是采用柱式法提取,可選擇含有DNaseI的試劑盒進(jìn)行提取,,吸附在膜上的核酸直接用DNaseI進(jìn)行消化,,可極大限度的降低DNA殘留。為了使這種酶對(duì)降解的影響較小化,,較好在采集時(shí)就穩(wěn)定好樣本中的 RNA,。昆明RNA提取試劑廠家批發(fā)價(jià)
總RNA提取試劑:提取的總RNA完整性好,無(wú)蛋白和DNA污染,,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),。蕪湖開(kāi)封RNA提取試劑
植物RNA提取:植物組織中,,富含酚類化合物,,或富含多糖,或含有某些尚無(wú)法確定的次級(jí)代謝產(chǎn)物,,或RNase的活性較高。這些物質(zhì)在細(xì)胞裂解后與RNA緊密結(jié)合形成難溶復(fù)合物或者膠狀沉淀,,很難將其去除,。所以我們?cè)谔崛≈参锝M織時(shí),要選取針對(duì)植物的試劑盒,,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化,、多糖化合物與核酸分離等難題。1,、植物的果皮,、果肉、種子,、葉片等要在研缽中充分研磨,,研磨過(guò)程中液氮要及時(shí)補(bǔ)充,,避免樣品融化,研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻,,避免RNA降解,。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,,則應(yīng)適當(dāng)減少提取用量,,否則組織研磨及裂解不徹底,會(huì)使提取的RNA產(chǎn)量較低,。3,、含水分較多的植物組織例如石榴果實(shí)、西瓜果實(shí),、桃子果實(shí)等則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量(可選100~200mg),。4、植物組織,,如植物葉片,、根莖、堅(jiān)硬的果實(shí)等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份,,再繼續(xù)進(jìn)行提取步驟,。常規(guī)的組織勻漿機(jī)對(duì)植物組織的勻漿效果可能不佳,一般不建議使用,。蕪湖開(kāi)封RNA提取試劑
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