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總RNA的定義:總RNA=mRNA+tRNA+rRNA,即:總RNA就是指mRNA,、tRNA,、rRNA的總和。這是在還沒有發(fā)現(xiàn)lncRNA等microRNA的時(shí)候的概念,。但是卻被各大公司默認(rèn)的概念,,一直延續(xù)至今。所以各位可以去各大公司的網(wǎng)站,,看一看總RNA提取試劑盒案例提供的RNA電泳圖,,只有表示總RNA的2條帶——28s和18s;表示microRNA的5s帶,,要不沒有,,要不很弱。那么mRNA在哪里呢,?從RNA電泳圖上能不能看到呢,?真正成熟的mRNA,主要集中在28s和18s之間和上下的熒光背景(一般每條基因mRNA量很少,,所以,,整體一般看不到明顯帶,只表現(xiàn)為28s和18s中間和上下的連續(xù)的涂抹帶),。帶口罩,、帽子,屏住呼吸,、不說話,,帶乳膠手套并要時(shí)常更換。杭州貴陽RNA提取試劑
常用總RNA提取試劑:異硫氰酸胍法和Trizol法是動(dòng)物組織及動(dòng)物細(xì)胞總RNA提取較常用的方法,,異硫氰酸胍法操作簡單快捷,,適用于樣本足夠大的常規(guī)動(dòng)物組織;Trizol法裂解能力較強(qiáng),,尤其適合小樣本及特別難提取的組織,,如兔子皮膚,動(dòng)物結(jié)締組織等總RNA的提取,;另外Trizol作為一種通用型的裂解試劑,,還可以用于植物組織、細(xì)菌,、菌類等組織的提取,。對于含多糖多酚的植物組織如油茶、茶葉,、油菜等還可以使用CTAB法進(jìn)行總RNA的提取,。提取RNA時(shí)我們經(jīng)常遇到的問題是:(1)RNA產(chǎn)量較低;(2)RNA有嚴(yán)重的鹽類污染,;(3)RNA有嚴(yán)重的有機(jī)溶劑污染;(4)樣品降解等問題,。杭州貴陽RNA提取試劑總RNA提取試劑:自備新開封或?qū)iT氯仿,,異丙醇,75%乙醇,,DEPC處理水,。
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒1、高純度:試劑盒的進(jìn)口吸附柱具有的專一吸附特性和強(qiáng)吸附力,。三管齊下保證所提取RNA的產(chǎn)量和純度,,前期得到的高質(zhì)量RNA才能保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)成功,尤其是對熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)等,。2,、無DNA污染可直接用于熒光定量PCR:目前市面上的試劑盒大多提出的RNA會(huì)出現(xiàn)DNA污染其結(jié)果嚴(yán)重影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),特別是非常靈敏的熒光定量PCR的實(shí)驗(yàn),。一些市面上單獨(dú)賣的去DNA污染的試劑,,效果不穩(wěn)定,去除DNA污染不徹底,。本產(chǎn)品操作簡單,,去除DNA徹底,得到的RNA樣品可直接用于熒光定量PCR,,反轉(zhuǎn)錄等各種后續(xù)實(shí)驗(yàn),。
細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):1.有效分離和提取細(xì)胞質(zhì)RNA,與細(xì)胞核RNA,。2.方便快捷的離心柱操作方式,。3.提取的RNA,品質(zhì)高,,產(chǎn)量多,。4.試劑盒不含苯酚,可提取所有RNA(含MicroRNA),。5.純化的RNA可用于任何應(yīng)用,,包括RT-PCR,,qRT-PCR,RNA-Seq,,陣列等,。6.細(xì)胞質(zhì)RNA不含DNA,可直接用于RT-PCR/qRT-PCR,。7.試劑盒可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或者組織樣品的提取,。在某些情況下,研究者們更希望能夠提取特定分餾的RNA,,而不是總RNA,。例如,在一些表達(dá)譜研究中,,較好能夠提取成熟的細(xì)胞質(zhì)(Cytoplasmic)RNA,。或者,,在研究分析未剪接的RNA前體時(shí),,提取細(xì)胞核(Nuclear)RNA會(huì)是一個(gè)更好的選擇。然而,,市面上絕大多數(shù)廠家只能為您分別提供2種試劑盒來提取細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核的RNA,,不僅費(fèi)用高昂,而且浪費(fèi)大量的材料與時(shí)間,。植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn):RNA純度更高,,無雜質(zhì)殘留,特別適合于對純度要求很高的下游實(shí)驗(yàn),。
動(dòng)物細(xì)胞RNA提?。?、懸浮細(xì)胞:可直接離心后棄掉培養(yǎng)基,,用無菌PBS清洗1~2遍后,,再用適量PBS懸浮起來,然后再加入裂解液進(jìn)行裂解,。千萬不要完全棄掉液體后,,往沉淀細(xì)胞里直接加入裂解液,這樣會(huì)使外表層的細(xì)胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細(xì)胞外側(cè),,從而限制沉淀內(nèi)部的細(xì)胞與裂解液的接觸,,從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解不徹底,降低RNA得率,。2,、半貼壁或貼壁不緊的細(xì)胞:棄掉培養(yǎng)基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿,,把細(xì)胞吹下來,,轉(zhuǎn)移到無RNA酶的EP管中,加裂解液進(jìn)行提取,。3,、貼壁細(xì)胞:需要先用胰酶消化,然后收集到無RNA酶的EP管中,,離心去其上清,,用PBS洗1~2次,去除多余的胰酶,,以適量PBS重懸后繼續(xù)進(jìn)行提取步驟,。總RNA的產(chǎn)量可達(dá)30μg,。產(chǎn)量可能因樣品類型而異,。廈門正規(guī)RNA提取試劑
總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,,顏色鮮明,便于分層,。杭州貴陽RNA提取試劑
植物RNA快速提取試劑盒:1.固體組織破碎設(shè)備,。可用下列裝置之一:1)玻璃勻漿器,。泡酸清潔,,用高壓滅菌蒸餾水洗滌數(shù)次。2)研缽,。適用于液氮凍存組織的研磨,,清洗方法同玻璃勻漿器。3)高速機(jī)械勻漿器(Polytron,,Tekmar或類似產(chǎn)品),,打開開關(guān),在蒸餾水中清洗分散器頭數(shù)次,。2.高壓蒸汽30分鐘消毒一次性吸頭離心管,。RNA沉淀溶解之后,應(yīng)嚴(yán)格使用高壓消毒的一次性用品,。然而PlantRNAtrip能在RNA酶污染環(huán)境下工作,,在裂解步驟可使用未高壓但潔凈的一次性吸頭和離心管,但光推薦在緊急情況下這樣做,。3.普通雙蒸水,,高壓消毒20分鐘。用于沖洗器皿,配制瓊脂糖凝膠和電泳用緩沖液,。DEPC處理的雙蒸水,。加DEPC到水中至終濃度為0.01%v/v,室溫過夜,,高壓消毒30分鐘,。用于溶解RNA,配制TE緩沖液和75%乙醇,。4.濕冰,。在冰上進(jìn)行操作有助于減少RNA降解。5.其它用品,。電泳槽,,雙蒸水沖洗。離心機(jī)和加樣器,,無需處理,。6.戴手套。注意某些實(shí)驗(yàn)如提取質(zhì)粒DNA如使用極大量RNA酶,,為防污染,,須較全仔細(xì)清洗實(shí)驗(yàn)器具和實(shí)驗(yàn)區(qū)域。杭州貴陽RNA提取試劑