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醫(yī)院檢驗中心糖原染色操作規(guī)程:1.雪夫氏試劑:400m1蒸餾水煮沸除去C02,,逐漸加堿性品紅2.08溶解后,待冷卻至60℃,,加1mm01兒HCl40ml,,再加偏重亞硫酸鈉(NaHSO:)4g,次日加活性碳1.5g,,放置半天后過濾,。配好后液體為無色透明,保存于4℃冰箱中,。2.過碘酸作用液:過碘酸1g溶于蒸餾水100ml中,,或取過碘酸鉀(1tI04)0。698加蒸餾水100ml,,微加熱使溶解,,再加濃硝酸0.3m1,置冰箱中保存,。3.固定液:95%乙醇90ml與甲醛10m1混勻,。4.20g/l甲基綠:甲基綠2g溶于100m1蒸餾水。[操作]_x005f_x005f_x005f_x000c_(1)新鮮或陳舊血片,、骨髓片于固定液內(nèi)10分鐘,。(2)水洗數(shù)次后,,對照片先用唾液消化30分鐘,也可在同一片,,在其中間用蠟筆劃界,,一半做對照,另一半做測定,。(3)水洗后,,滴加過碘酸數(shù)滴于涂片上,作用10分鐘后,,再水洗數(shù)次,。多糖主要指糖原,它是一種膠樣液態(tài)存在于肝細胞,、骨骼肌,、心肌等處。江西如何使用糖原染色試劑盒廠家供應(yīng)
臨床意義:1.急性白血病類型的鑒別紅白血病的幼紅細胞PAS染色多呈陽性反應(yīng),,陽性率高,,反應(yīng)強;成熟紅細胞有時亦可為陽性,;急性淋巴細胞白血病的原,、幼淋巴細胞PAS染色多為紅色顆粒或塊狀陽性反應(yīng),;急性粒細胞白血病的原粒細胞呈陰性或胞質(zhì)呈彌漫淡色陽性反應(yīng),;急性早幼粒細胞白血病異常早幼粒細胞的PAS染色為陽性反應(yīng);急性單核細胞白血病原,、幼單核細胞PAS染色陽性反應(yīng)呈彌漫分布的紅色細顆粒,,巨核細胞白血病原巨核細胞PAS染色呈陽性或強陽性反應(yīng),表現(xiàn)為紅色顆?;驂K狀,。2.各類貧血的鑒別MDS、缺鐵性貧血,、珠蛋白生成障礙性貧血(曾稱地中海貧血)的幼紅細胞PAS染色多為陰性反應(yīng),,有時可出現(xiàn)陽性反應(yīng);巨幼紅細胞貧血,、溶血性貧血,、再障的幼紅細胞PAS染色為陰性。如何使用糖原染色試劑盒報價在肝糖原染色中用10%甲醛液固定肝組織,。
糖原染色的原理與操作方法是什么:(1)原理:過碘酸將血細胞內(nèi)的糖原氧化,,生成醛基。醛基與雪夫液中的無色品紅結(jié)合,,形成紫色化合物,,定位于細胞質(zhì)中,。(2)操作方法:干燥涂片,滴加甲醛固定液固定10分鐘,,流水沖洗,,晾干。滴加過碘酸溶液作用20分鐘,,流水沖洗,,晾干。滴加雪夫液作用60分鐘,,流水沖洗,,晾干。滴加甲基綠溶液復(fù)染10分鐘,,流水沖洗,,晾干鏡檢。細胞的組織化學(xué)方法,,是研究細胞成分常用的方法之一,。它是利用化學(xué)試劑與細胞內(nèi)的某些物質(zhì)進行化學(xué)反應(yīng),從而在細胞局部形成有色沉淀物,,再通過顯微鏡對組織內(nèi)的生物化學(xué)成分進行定性,、定位、定量研究
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:盡可能選取小塊新鮮組織及時固定,。糖原易溶于水,,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,,更易溶于水,,固定之前決不能用水或生理鹽水等浸洗。應(yīng)避免用水溶性固定液,,宜采用酒精性固定液,,如Carnoy液,能較好地保存糖原,,但有使糖原流動到細胞一側(cè)的現(xiàn)象,,多數(shù)人認為是由于固定劑把細胞內(nèi)的糖原推向固定劑對組織浸透的方向而造成。其他組織應(yīng)用中性福爾馬林固定為佳,。組織在4℃左右溫度內(nèi)固定與保存,,是針對糖的性質(zhì)和避免糖原溶于水而采取的相應(yīng)措施。乙醇能沉淀白蛋白,、球蛋白,,亦能**白和糖原沉淀,但仍可溶于水,,因此較好不單獨使用乙醇固定,,以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳該依據(jù)切片厚薄,、組織的類別等決定。
糖原及粘液染色法注意事項:1,、糖原的固定要及時,,而且標本要新鮮。2,、如用無水酒精作糖原的固定劑,,有它的弊病,因無水酒精滲透較慢,,而且容易產(chǎn)生極化,,(極化是糖原顆粒趨向于細胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果較佳,,其配法如下:苦味酸飽和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3,、各種試劑必須化學(xué)純,亞硫酸鈉須有濃厚氣味,,器皿必須潔凈而干燥,,染色缸亦是。4,、如果Schiff氏試劑,,在經(jīng)過活性碳吸附漂白后不顯無色,首先應(yīng)考慮試劑中的偏重亞硫酸鈉是否失效,。如果偏重亞硫酸鈉氣味不濃,,使用時可考慮適當?shù)脑黾佑昧俊F浯慰紤]堿性品紅本身,,常常雖屬同一生產(chǎn)廠家,,但不同批號,其效果就可能不同,,應(yīng)特別引起注意~冷凍切片染色效果不佳,成熟時間2個月,染色時間一般15-20分鐘,。福建正規(guī)糖原染色試劑盒
切取的材料應(yīng)小而薄,便于固定液迅速滲入內(nèi)部,。江西如何使用糖原染色試劑盒廠家供應(yīng)
糖原染色:1,、概況PAS染色法(PeriodicAcid-Schiffstain)在組織學(xué)上,主要用來檢測組織中的糖類,。過碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基,,再用Schiff試劑和醛基反應(yīng)使呈現(xiàn)紫紅色。2,、原理PAS染色又稱過碘酸雪夫染色,,糖原染色。一般用來顯示糖元和其它多糖物質(zhì)。過碘酸能使細胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化成二醛,,再與Schiff氏液的無色品紅結(jié)合,,紅色,定位于胞漿上,。3,、應(yīng)用隨著醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)的發(fā)展,糖原染色應(yīng)用的范圍更加普遍,,如用以證明與鑒別細胞內(nèi)空泡狀的性質(zhì),,心肌病變及其他心血管疾病的診斷,糖原累積病診斷和研究,,糖尿病的診斷和研究,,用于某些的診斷等。江西如何使用糖原染色試劑盒廠家供應(yīng)