細胞轉(zhuǎn)染,，你至少要掌握以下幾點：胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,，RNA等導入真核細胞的技術(shù)。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展,，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具,。在研究基因功能、調(diào)控基因表達,、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學試驗中,，其應用越來越普遍?？煞譃樗矔r轉(zhuǎn)染,，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染等。瞬時轉(zhuǎn)染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,，因此一個宿主細胞可存在多個拷貝數(shù),，產(chǎn)生高水平的表達,，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析,。一般來說,，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72h內(nèi)分析結(jié)果,，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中,，也可能作為一種游離體存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高,。外源DNA整合到染色體中概率很小,，通常需要一些選擇性標記反復篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。必須通過對藥物的抗性篩選進行擴增或通過表型變化進行鑒定,。唐山細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家供應

如何有效提高細胞轉(zhuǎn)染實驗效率：1.選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,，但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉(zhuǎn)染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑,。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻,，通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉(zhuǎn)染試劑。當然,，較適合的是高效,、低毒、方便,、廉價的轉(zhuǎn)染試劑,。2.保持較佳的細胞狀態(tài)一般低的細胞代數(shù)（<50）能確保基因型不變,。較適合轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到指數(shù)生長期的細胞,，細胞生長旺盛，較容易轉(zhuǎn)染,。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化,。也就是說同一種系的細胞株,，在各實驗室不同培養(yǎng)條件下，其生物學性狀發(fā)生不同程度的改變,，導致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化,。因此，如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低,，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結(jié)果,。寧波正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹一類是瞬時轉(zhuǎn)染,，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（很長轉(zhuǎn)染）。

如何提高細胞轉(zhuǎn)染效率：1.組織培養(yǎng)試劑優(yōu)化細胞生長條件,。只使用新鮮配制的培養(yǎng)基和添加劑,，并經(jīng)可能減少所用試劑的變更?；A培養(yǎng)基—目前所使用的各種市售培養(yǎng)基(如,，RPMI1640和DMEM)。培養(yǎng)基的成分包括營養(yǎng)物質(zhì)(氨基酸,，葡萄糖),，維生素，無機鹽,，和緩沖物質(zhì),。有些成分非常不穩(wěn)定，因此如果不在使用時新鮮加入就可能會產(chǎn)生問題,。務必要使培養(yǎng)基避光保存,。因為已知有一些組分和緩沖物質(zhì)，如HEPES,，當暴露于光照下就會分解產(chǎn)生細胞毒性物質(zhì),。另外，血清,，添加劑,，來自于培養(yǎng)箱內(nèi)的污染物、化學物質(zhì),，或/細胞的污染也都可能影響到細胞生理,。2.細胞生長狀態(tài)密切觀察您的細胞;確保它們狀態(tài)良好。在開始轉(zhuǎn)染細胞之前,，先制定一個適當?shù)姆N板方案,，使細胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持較佳狀態(tài)。增加成功幾率—細胞是轉(zhuǎn)染過程中的一個關(guān)鍵元素,，它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的較重要的變量,。

轉(zhuǎn)染的注意事項：用于蛋白生產(chǎn)的細胞的轉(zhuǎn)染可以在添加有血清或無血清培養(yǎng)基中進行。但更傾向于使用無血清培養(yǎng)基表達蛋白,，因為血清蛋白會干擾下游表達蛋白的純化,。無血清培養(yǎng)基一般針對某一特定細胞類型優(yōu)化并有幾類無血清培養(yǎng)基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培養(yǎng)基低得多）,。無蛋白培養(yǎng)基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物,，限定化學成分的培養(yǎng)基不含有蛋白或未知組成的成分。多種多樣的配方使您可以選擇較適合您應用的一種,。在含血清時轉(zhuǎn)染的細胞可以適應無血清培養(yǎng)基,，無蛋白培養(yǎng)基或限定化學成分的培養(yǎng)基,。在部分情況下（如293-F，293-H,，COS-7和CHO-S）,，對于已適應無血清或無蛋白培養(yǎng)基的細胞，可以使用其培養(yǎng)基進行轉(zhuǎn)染,。其他一些無血清培養(yǎng)基包含克制陰離子脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染的成分,，在這些情況下，有必要在諸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性,，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時,。

細胞電轉(zhuǎn)染實驗的幾點建議：1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉(zhuǎn)染實驗非常重要，電場強度不能過高,，過高會增加細胞的死亡率,；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔,。不同細胞系具有不同的較佳場強值，實驗前應測定所轉(zhuǎn)染細胞系的較佳電場強度,。2.細胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細胞一般選取處于對數(shù)生長期的細胞（15代以內(nèi),，傳代后2d）。因為處于對數(shù)生長期的細胞分裂旺盛,，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細胞差,，電轉(zhuǎn)后，細胞膜的恢復能力強,，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA細胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或應用而異,。成都正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家便宜

對于貼壁細胞，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日,，用胰酶處理為單細胞懸液,。唐山細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家供應

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.準備不足做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的時候，在開展正式實驗前要多做預試驗,，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：脂質(zhì)體的用量、DNA密度,、細胞密度,、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉(zhuǎn)的時候,，如果電壓太大,，往往會發(fā)生細胞大量死亡的情況。不同的細胞,，需要的電壓是不一樣的,。這就要求我們多做預實驗,，多摸索條件。對于大多數(shù)細胞來說,，其較佳電壓位于250-1250v/cm,。另外，就是進行轉(zhuǎn)染的細胞應該處于對數(shù)生長期,。處于對數(shù)生長期的細胞的抗損傷能力是較強的,。細胞濃度應該處于5x106到1x107／mL之間。每次轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒應該控制在4-6μg,，如果﹥10μg,，轉(zhuǎn)染效率也較大降低。唐山細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家供應