細胞冷凍的原理：細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力,。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗,。而且適度地保存一定量的細胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用,。除此之外,，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈,、交換和運送某些細胞,。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低,，加之在緩慢凍結條件下,，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成,，從而避免細胞損傷,。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。無血清細胞凍存液存儲條件：推薦將產(chǎn)品分裝成小管后,，再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存,。昆明無血清細胞凍存液進貨價

無血清細胞凍存液，細胞凍存與復蘇后,，平均活細胞回收比例超過80%,。與含血清凍存液比較，BI無血清凍存液細胞存活率都有較佳的表,，BI無血清細胞凍存液也適用于動物血清培養(yǎng)的細胞凍存,。復蘇細胞：1.將細胞凍存管由液態(tài)氮中取出，置于37度水浴快速溶解回溫。此時可準備培養(yǎng)基,、無菌15ml離心管,、培養(yǎng)瓶。2.于生物安全柜內(nèi),，直接以少量培養(yǎng)基反復沖融,，使細胞團塊化凍。3.先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基,，再將化凍的細胞懸液加入離心管中,。以200~300g，3分鐘離心收集細胞,。4.倒去上清液,，以新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。5.隔天更換新鮮培養(yǎng)基,，并觀察細胞存活狀況。無血清細胞凍存液銷售廠家無血清細胞凍存液用途：無血清細胞凍存液用于造血干細胞,、間充質(zhì)干細胞等干細胞的儲存,。

細胞凍存液是如何保護細胞的：當溫度進一步下降，細胞內(nèi)外都結冰,，產(chǎn)生冰晶損傷,。但是如果在溶液中加入冷凍保護劑，則可保護細胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷,。因為冷凍保護劑容易同溶液中的水分子結合,，從而降低冰點，減少冰晶的形成,，并且通過其摩爾濃度降低未結冰溶液中電解質(zhì)的濃度,，使細胞免受溶質(zhì)損傷，細胞得以在較低溫條件下保存,。在復蘇時,，一般以很快的速度升溫，1-2分鐘內(nèi)即恢復到常溫,，細胞內(nèi)外不會重新形成較大的冰晶,，也不會暴露在高濃度的電解質(zhì)溶液中過長的時間，從而無冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生,，凍存的細胞經(jīng)復蘇后仍保持其正常的結構和功能,。

細胞凍存是將細胞放在低溫環(huán)境，減少細胞代謝,，以便長期儲存的一種技術,。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,，起到了細胞保種的作用。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,，利用凍存技術可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。目前現(xiàn)有技術中,，細胞凍存液中的主要成分有10％二甲基亞砜(DMSO),、20％～90％胎牛血清(FBS)、剩余組分為完全培養(yǎng)基,。培養(yǎng)基以及FBS可為細胞提供必要的營養(yǎng)物質(zhì),。DMSO是一種滲透性保護劑，能夠降低細胞冰點,，減少冰晶的形成,，從而達到降低細胞損傷的保護效果。但FBS屬于動物源性物質(zhì),，成分比較復雜，在臨床應用上存在潛在的風險,，也增加了污染的幾率,，并且由于凍存液中含有動物血清，會導致凍存液的成分存在不穩(wěn)定的因素,。PH,，電解質(zhì)等的改變，進而促使細胞死亡,。

凍存細胞注意事項：冷凍保護劑可降低培養(yǎng)基的冰點,，并可減緩冷卻速度，較大降低冰晶形成的危險(冰晶可損傷細胞,，導致細胞死亡),。注：DMSO可促進有機分子進入組織。操作含DMSO的試劑時,，應采用與此類物質(zhì)安全危害相適應的設備和操作規(guī)范,，并應按照當?shù)胤ㄒ?guī)處置此類試劑。建議可使用廠商生產(chǎn)的無血清細胞凍存液,，使用方便,，復蘇率高。注意冷凍保護劑DMSO的品質(zhì)：DMSO應為試劑級等級,，無菌且無色,，以5-10ml小體積分裝，4℃避光保存,，勿作多次解凍,。無血清細胞凍存液使用方法：將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中,。寧波天津無血清細胞凍存液

無血清細胞凍存液使用方法：按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。昆明無血清細胞凍存液進貨價

細胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細胞凍存液,，4℃預冷（新鮮配制的凍存液會產(chǎn)生大量的熱）,；取對數(shù)生長期的細胞，用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來,；懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中,；離心1200rpm，6min,；去除上清液,，逐漸加入適量預冷的細胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻,，計數(shù),，調(diào)節(jié)凍存液中的細胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml；將細胞分裝入凍存管中,，每管1~1.5ml,；在凍存管上標明細胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名,；凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min,；到達-80℃時，則可迅速放入液氮中,。昆明無血清細胞凍存液進貨價