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無(wú)血清細(xì)胞凍存液是一種無(wú)血清細(xì)胞凍存液,通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株(tumour細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞),,凍存細(xì)胞可在-80℃長(zhǎng)期保存(>5年),。CELLSAVING配方成分明確,不含動(dòng)物來(lái)源性蛋白,,不含血清,,可減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染,,保證凍存細(xì)胞的安全,。細(xì)胞凍存液操作簡(jiǎn)便,無(wú)需程序降溫,,可在-80度或液氮中長(zhǎng)期保存,。相比于傳統(tǒng)凍存液,,埃澤思生物推出的此款凍存液可以明顯增加細(xì)胞活力,穩(wěn)定保持細(xì)胞特性,,以及細(xì)胞多能性,,并且可以穩(wěn)定保持細(xì)胞的正常核型和增殖能力。細(xì)胞凍存液已經(jīng)經(jīng)過(guò)動(dòng)物直接注射實(shí)驗(yàn)檢測(cè),,包括靜脈注射,,皮下注射途徑,無(wú)明顯細(xì)胞毒性,,動(dòng)物安全性非常高,。將分裝好的細(xì)胞凍存管,直接置于-80 度冰箱過(guò)夜保存,。南昌無(wú)血清細(xì)胞凍存液直銷價(jià)
永生化的細(xì)胞系往往相當(dāng)健壯,,因此,使用實(shí)驗(yàn)室自制的凍存培養(yǎng)基,,效果也不錯(cuò),。典型的配方是在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清,或只是在血清中加入10%的DMSO,。DMSO的作用是取代細(xì)胞中的一些水,,以防止冰晶形成,刺穿細(xì)胞,。據(jù)賽默飛世爾科技的較深科學(xué)家RhondaNewman介紹,,DMSO還能防止細(xì)胞在冷凍期間發(fā)生收縮,而后在解凍時(shí)又變得腫脹,。血清,,這種富含營(yíng)養(yǎng)成分的物質(zhì),直接支持細(xì)胞,?!爱?dāng)細(xì)胞處于這種營(yíng)養(yǎng)豐富的環(huán)境時(shí),它們能夠更好地復(fù)蘇,。南昌無(wú)血清細(xì)胞凍存液直銷價(jià)無(wú)血清凍存液用途:置于-20℃保存,,有效期為3年。
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。為什么要進(jìn)行細(xì)胞凍存,?連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞系容易發(fā)生遺傳漂變,,有限細(xì)胞系較終會(huì)發(fā)生衰老,所有培養(yǎng)的細(xì)胞都易受到微生物污染,,即使運(yùn)轉(zhuǎn)情況較好的實(shí)驗(yàn)室也會(huì)遇到設(shè)備故障的問(wèn)題。由于已建立的細(xì)胞系是一種寶貴資源,,更換細(xì)胞系成本高昂,,而且耗費(fèi)時(shí)間,因此,,十分有必要將細(xì)胞冷凍起來(lái)長(zhǎng)期保存,。除此之外,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買,、寄贈(zèng),、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇操作步驟:細(xì)胞凍存和復(fù)蘇采取“慢凍快融”的原則,,慢速冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水份滲出細(xì)胞外,,減少細(xì)胞內(nèi)形成冰晶的機(jī)會(huì),快融以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,,避免慢速融化水份滲入細(xì)胞內(nèi),,再次形成胞內(nèi)冰晶造成對(duì)細(xì)胞的損傷。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力,。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液用途:無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于造血干細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞等干細(xì)胞的儲(chǔ)存。
冷凍速率:冷凍速率是指降溫的速度,,直接關(guān)系到冷凍效果,。冷凍速度不同,細(xì)胞內(nèi)水分向外流動(dòng)的情況也不相同,,不同的冷凍速度既然能使細(xì)胞內(nèi)發(fā)生不同的生理變化,,也可以對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生不同的損傷。超快速玻璃化冷凍對(duì)細(xì)胞存活來(lái)說(shuō)是較為理想的冷凍方法。細(xì)胞內(nèi)外呈玻璃化凝固,,無(wú)冰晶形成或形成很小的冰晶,,對(duì)細(xì)胞膜和細(xì)胞器不致造成損傷,細(xì)胞也不會(huì)在高濃度的溶質(zhì)中長(zhǎng)時(shí)間暴露而受損,。不同細(xì)胞的較適冷凍速率不同,。小鼠骨髓干細(xì)胞、酵母,、人紅細(xì)胞的較適冷凍速率分別為1.6℃/min,、7℃/min和200℃/min。細(xì)胞與細(xì)胞之間的較適冷凍速率可在1.6℃~300℃/min,,故對(duì)一種細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存之前,,首先需要測(cè)定其較適冷凍速率,以保證獲得較高的冷凍存活率,。根據(jù)凍存方式不同可以分為慢速凍存(程序降溫法)與快速凍存(非程序降溫法),。寧波長(zhǎng)沙無(wú)血清細(xì)胞凍存液
1000 rmp離心5分鐘,去除離心管中的上清液,,收集細(xì)胞沉淀,。南昌無(wú)血清細(xì)胞凍存液直銷價(jià)
細(xì)胞凍存液的操作步驟:1.配置含10%DMSO或凡士林、10~20%小牛血清的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液;2.取對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的體細(xì)胞,,除去舊細(xì)胞培養(yǎng)液,,用PBS清理。3.除去PBS,,添加適量蛋白酶(遮蓋細(xì)胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長(zhǎng)發(fā)育的體細(xì)胞消化吸收出來(lái);4.抽濾1000rpm,,5min;5.除去蛋白酶,添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液,,用塑料吸管輕輕地吹打使體細(xì)胞勻稱,,記數(shù),調(diào)整凍存液中體細(xì)胞的較后相對(duì)密度為5牙周106/ml~1牙周107/ml;6.將體細(xì)胞分裝進(jìn)凍存管中,,每管1~1.5ml;7.在凍存管上標(biāo)出體細(xì)胞的名字,,凍存時(shí)間及作業(yè)者;8.凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序流程為減溫速度-1~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃下列時(shí),可升至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),,則可快速滲入液態(tài)氮中,。也可將配有體細(xì)胞的凍存管放進(jìn)-20℃電冰箱2h,隨后放進(jìn)-70℃電冰箱中留宿,,取下凍存管,,移進(jìn)液氮容器內(nèi)。南昌無(wú)血清細(xì)胞凍存液直銷價(jià)