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PAS染色試劑配制及染色方法:1.材料與方1.1實(shí)驗(yàn)材料新鮮小白鼠肝臟,、腎臟標(biāo)本各30例,,均來自我室實(shí)驗(yàn)材料。1.2主要試劑1.2.1AAF固定液又稱酒精醋酸福爾馬林混合固定液,,其配方:無水乙醇80mL,,冰醋酸5mL、甲醛10mL,。1.2.2Carnoy固定液氯仿300mL,,冰醋酸100mL,95%酒精600mL。1.2.3過碘酸溶液0.5g過碘酸(HIO)溶于100mL蒸餾水或者70%酒精溶液中,,或者按如下配方配制:過碘酸0.8g,,95%乙醇70mL,醋酸鈉0.27g,,水20mL。待溶解后置于4℃冰箱避光保存,。1.2.4無色品紅液(Schiff氏液)在三角燒內(nèi)加入蒸餾水500mL,,煮沸后,在保持微沸的情況下,,加入堿性品紅2.5g,,并不斷搖動(dòng)約5min(勿使之沸騰),使堿性品紅徹底溶解(溶解液為深紅色),。冷卻到50℃時(shí),,過濾,加入1N鹽酸50mL,,再待冷卻至25℃時(shí)加入偏重亞硫酸鈉2.5g,,塞住瓶口,搖動(dòng)容器以充分混合(此時(shí)顏色明顯變淡),,然后避光放置或冰箱內(nèi)24h遇醋酸發(fā)生沉淀,,胃粘蛋白則除外。提供糖原染色試劑盒哪里買
糖原染色:1,、概況PAS染色法(PeriodicAcid-Schiffstain)在組織學(xué)上,,主要用來檢測(cè)組織中的糖類。過碘酸把糖類相鄰兩個(gè)碳上的羥基氧化成醛基,,再用Schiff試劑和醛基反應(yīng)使呈現(xiàn)紫紅色,。2、原理PAS染色又稱過碘酸雪夫染色,,糖原染色,。一般用來顯示糖元和其它多糖物質(zhì)。過碘酸能使細(xì)胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化成二醛,,再與Schiff氏液的無色品紅結(jié)合,,紅色,定位于胞漿上,。3,、應(yīng)用隨著醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展,糖原染色應(yīng)用的范圍更加普遍,,如用以證明與鑒別細(xì)胞內(nèi)空泡狀的性質(zhì),,心肌病變及其他心血管疾病的診斷,糖原累積病診斷和研究,糖尿病的診斷和研究,,用于某些的診斷等湖南哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒取材必須新鮮,,這一點(diǎn)對(duì)于從事細(xì)胞生物學(xué)研究尤為重要。
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個(gè)方面:PAS染色時(shí)需于暗處加蓋反應(yīng),,染色時(shí)間10~20min(染色時(shí)間長(zhǎng)短取決于試劑的質(zhì)量和環(huán)境溫度,,SO濃度高,染色時(shí)間適當(dāng)縮短,;環(huán)境溫度高,,染色時(shí)間也應(yīng)適當(dāng)縮短,反之則需適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間),。染色過程中不能接觸伊紅,,以免造成顏色誤差[4]。作糖原染色時(shí),,較好作消化對(duì)照,,即取兩張連續(xù)切片,其中一張脫蠟至水后,,用1%淀粉酶于37℃消化30min,,水洗后與不經(jīng)消化處理的切片一起置0.5%高碘酸液氧化,如經(jīng)消化處理的切片染色陰性,,不經(jīng)消化處理的切片染色陽(yáng)性,,即肯定為糖原[6]。偏重亞硫酸鈉(鉀)溶液配置后,,不能保存,,因此,必須現(xiàn)配現(xiàn)用,,用過一次即應(yīng)廢棄,。各種試劑必須是化學(xué)純或者分析純。器皿,、染色缸必須潔凈而干燥,。
糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蠟切片脫蠟至水。(2)0.5%過碘酸水溶液5分鐘,?;?%過碘酸95%酒精溶液(過碘酸再結(jié)晶應(yīng)重新配制使用)。(3)蒸餾水洗,,70%酒精洗,。(4)Schiff氏液15-30分鐘。(Schiff氏液從冰箱取出升至室溫使用)(5)流水沖洗10分鐘,。(6)蘇木素浸染細(xì)胞核2-3分鐘,。(7)脫水、透明、封蓋,。結(jié)果:糖原呈紅色,,細(xì)胞核呈藍(lán)色。試劑配制:(1)0.5%過碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液,。(2)Schiff氏試劑,。堿性品紅1g蒸餾水200ml1N鹽酸(98.3ml比重1.16鹽酸,加入蒸餾水成1000ml)20ml偏重亞硫酸鈉或鉀1g堿性品紅1g加入200ml蒸餾水,,攪拌加熱沸騰,,待冷卻至50℃過濾,加入當(dāng)量鹽酸至25℃時(shí)加入偏重亞硫酸鈉,。置于暗處,兩天后溶液變桔黃色或草黃色,,然后加入少量活性碳并震蕩,、過濾,此時(shí)溶液應(yīng)為無色,。保存冰箱備用,。溶液如顯淺紅色或草黃色,染色效果較差,。切取材料時(shí)刀要銳利,,避免因擠壓細(xì)胞使其受到損傷。
糖原染色――檢查項(xiàng)目的注意細(xì)節(jié):其判斷標(biāo)準(zhǔn)隨細(xì)胞不同而異,,一般分為5級(jí),,即0~4級(jí)。糖原染色――檢查項(xiàng)目的一般步驟:(1)新鮮干燥血片或骨髓片于95%乙醇中固定10min,,蒸餾水沖洗數(shù)次,,待干。(2)浸入10g/L過碘酸水溶液中10min,,蒸餾水沖洗數(shù)次,,待完全干燥。(3)放入雪夫液30min,,用自來水沖洗約5min,,再用蒸餾水沖洗,然后用20g/L甲基綠復(fù)染20min,,水洗,,晾干。糖原染色――檢查項(xiàng)目結(jié)果解讀:(1)新鮮干燥血片或骨髓片于95%乙醇中固定10min,,蒸餾水沖洗數(shù)次,,待干。(2)浸入10g/L過碘酸水溶液中10min,蒸餾水沖洗數(shù)次,,待完全干燥,。(3)放入雪夫液30min,用自來水沖洗約5min,,再用蒸餾水沖洗,,然后用20g/L甲基綠復(fù)染20min,水洗,,晾干,。為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。安徽口碑好的糖原染色試劑盒哪里買
故PAS染色有助于三種急性白血病類型的鑒別,。提供糖原染色試劑盒哪里買
染色的一般原則:1.熒光素產(chǎn)品一般為微量試劑,取用前請(qǐng)離心集液,,以及避光保存和使用,。建議您在收到產(chǎn)品之后,分裝為小份避光保存于-20℃,,即用即取,。2.式細(xì)胞儀只可檢測(cè)單細(xì)胞懸液,如使用組織樣本,,首先必須制備成單細(xì)胞懸液,,細(xì)胞數(shù)量不應(yīng)低于1X106/ml。3.推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,。如果是貼壁細(xì)胞,,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不當(dāng),,可能引起假陽(yáng)性,,而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán),而影響檢測(cè),??蓪⒁让赶蠹?xì)胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止進(jìn)一步的損傷,。提供糖原染色試劑盒哪里買