染色的原理和臨床意義:在同一張涂片上進行兩種酯酶染色的方法稱為酯酶雙染色,。多數(shù)采用一種特異性酯酶加一種非特異性酯酶染色,常用的有α-醋酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色,、α-丁酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色等。反應(yīng)的原理基本上同各自的染色原理,,同一張涂片上的細胞要分別在兩種不同的基質(zhì)液中作用一定時間,,較后復染、顯微鏡觀察,。酯酶雙染色可同時觀察兩種不同的白血病細胞,,因此在鑒別白血病類型方面明顯優(yōu)于單項染色。急性粒-單核細胞白血病該染色法在急性粒-單核細胞白血病的同一張涂片上可分別出現(xiàn)α-NBE染色和NAS-DCE染色陽性反應(yīng)的細胞,,甚至少數(shù)病例在單個細胞內(nèi)同時出現(xiàn)以上兩種酯酶染色的雙重陽性反應(yīng),,因此酯酶雙染色反應(yīng)在急性粒-單核細胞白血病的診斷上具有獨特價值。無水酒精滲透較慢,而且容易產(chǎn)生極化,。浙江品質(zhì)好的糖原染色試劑盒廠家供應(yīng)
糖原染色:細胞內(nèi)含1,,2-乙二醇基的多糖類經(jīng)過碘酸氧化后產(chǎn)生醛基,與特殊染液作用,,使無色品紅變成紅色化合物,,沉淀于胞質(zhì)之中。紅色的深淺與細胞中起反應(yīng)的1,,2-乙二醇基的量呈正比,。用于不典型巨核細胞與李—斯細胞的鑒別,前者PAS反應(yīng)為強陽性,,后者為陰性或弱陽性,;用于高雪細胞和尼曼一匹克細胞的鑒別,前者PAS反應(yīng)為強陽性,,而后者反應(yīng)為陰性或弱性,。正常值正常情況下,紅細胞系統(tǒng)的原,、幼紅細胞和成熟紅細胞,;粒細胞系統(tǒng)的原粒細胞、原單核細胞和大多數(shù)淋巴細胞為陰性反應(yīng),。自早幼粒階段以后的粒細胞和幼單核細胞可呈弱陽性反應(yīng),。湖南正規(guī)糖原染色試劑盒進貨價骨骼肌活檢臨床操作及染色質(zhì)量控制。
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:PAS染色時需于暗處加蓋反應(yīng),,染色時間10~20min(染色時間長短取決于試劑的質(zhì)量和環(huán)境溫度,,SO濃度高,染色時間適當縮短,;環(huán)境溫度高,,染色時間也應(yīng)適當縮短,反之則需適當延長反應(yīng)時間),。染色過程中不能接觸伊紅,,以免造成顏色誤差[4]。作糖原染色時,,較好作消化對照,,即取兩張連續(xù)切片,其中一張脫蠟至水后,,用1%淀粉酶于37℃消化30min,,水洗后與不經(jīng)消化處理的切片一起置0.5%高碘酸液氧化,如經(jīng)消化處理的切片染色陰性,,不經(jīng)消化處理的切片染色陽性,,即肯定為糖原[6],。偏重亞硫酸鈉(鉀)溶液配置后,不能保存,,因此,,必須現(xiàn)配現(xiàn)用,用過一次即應(yīng)廢棄,。各種試劑必須是化學純或者分析純,。器皿、染色缸必須潔凈而干燥,。
糖原pas染色液配制及使用方法:1,、常規(guī)固定,常采用10%的福爾馬林,,常規(guī)脫水包埋,。2、石蠟切片脫蠟入蒸餾水,;冰凍切片直接入蒸餾水,。3、自來水沖洗2~3min,,再用蒸餾水浸洗2次,。4、入過碘酸溶液,,室溫放置,,一般不宜超過10min。5,、自來水沖洗1次,,再用蒸餾水浸洗2次。6,、入SchiffReagent,,置于室溫陰暗處浸染。7,、自來水沖洗10min,。8、入蘇木素染色液,,染細胞核,。9、酸性乙醇分化液分化,。_x005f_x005f_x005f_x000c_10、自來水沖洗10~15min,,更換蒸餾水清洗,,使其返藍,。11、逐級常規(guī)乙醇脫水,。二甲苯透明,,中性樹膠封固。應(yīng)該盡可能割取生活著的組織塊,,并隨即投入固定液,。
PAS技術(shù)是很少可檢測不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原,。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟,。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去,。人類的唾液被認為是消化糖原的一種有效手段,,但是出于安全以及缺乏標冸唾液的考慮,不主張應(yīng)用唾液,。所以網(wǎng)狀纖維的組織化學染色,,在臨床病理診斷上占著相當重要的位置。再糖原染色,可鑒別是糖原還是其他多糖類物質(zhì),。福建哪家提供糖原染色試劑盒進貨價
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糖原及粘液染色法注意事項:1、糖原的固定要及時,,而且標本要新鮮,。2、如用無水酒精作糖原的固定劑,,有它的弊病,,因無水酒精滲透較慢,而且容易產(chǎn)生極化,,(極化是糖原顆粒趨向于細胞的一端),。故用Gendre氏固定液效果較佳,其配法如下:苦味酸飽和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3,、各種試劑必須化學純,,亞硫酸鈉須有濃厚氣味,器皿必須潔凈而干燥,,染色缸亦是,。4、如果Schiff氏試劑,,在經(jīng)過活性碳吸附漂白后不顯無色,,首先應(yīng)考慮試劑中的偏重亞硫酸鈉是否失效,。如果偏重亞硫酸鈉氣味不濃,使用時可考慮適當?shù)脑黾佑昧?。其次考慮堿性品紅本身,,常常雖屬同一生產(chǎn)廠家,但不同批號,,其效果就可能不同,,應(yīng)特別引起注意。浙江品質(zhì)好的糖原染色試劑盒廠家供應(yīng)