鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：兩組培養(yǎng)皿中,，隨著過(guò)氧化氫濃度的增高,，均可見(jiàn)細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯加重,，細(xì)胞存活率及細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫活力明顯下降,，細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,，Bcl-2/Bax比值明顯降低,，呈劑量依賴性,。而在相同濃度過(guò)氧化氫誘導(dǎo)下,，與對(duì)照組相比,，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯減弱，細(xì)胞存活率,、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高,，細(xì)胞凋亡率和丙二醛水平明顯減低。表明鼠尾膠原對(duì)過(guò)氧化氫所致的心肌細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用,，其機(jī)制可能與提高超氧化物歧化酶活力,，減少丙二醛產(chǎn)生及提高Bcl-2的表達(dá)有關(guān)。鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,。南昌鼠尾膠原推薦廠家

詳細(xì)步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min,；2.將尾巴剪開(kāi)、去掉皮毛,，并剪成小段（3cm左右）,，抽出銀色的尾鍵；3.把剪碎的尾鍵置于150ml,，0.1％消過(guò)毒的醋酸中,，4℃放置，并不時(shí)振蕩,；4.48h后取上清,，4000轉(zhuǎn)離心30min后，取上清,；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存,。有時(shí)可繼續(xù)向4。中沉淀中加入10－20ml醋酸,，重復(fù)以上步驟,，以制備更多的鼠尾膠。在使用時(shí),，先將冰存的膠原液在室溫下解凍,，再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿：1）用吸管吸取膠原液,，在無(wú)菌的培養(yǎng)器皿的生長(zhǎng)面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液。2）若包被的是培養(yǎng)瓶,，可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻,。讓氨氣充入瓶?jī)?nèi)后，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞,。若為培養(yǎng)皿或板的話,，可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi)，將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi),，蓋緊飯盒蓋,，四周用封口膠封死。南昌鼠尾膠原推薦廠家制備鼠尾膠原：按每克尾腱50ml的比例,，加入0.1%醋酸溶液,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上，pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,，在成膠過(guò)程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來(lái)中和。需要的溶液（均需要無(wú)菌,、預(yù)冷）10mg/L酚紅用于pH指示）0.1mol/LNaOH,，0.1mol/L乙酸(一般不用)，雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便,，成本低廉,。

鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心，簡(jiǎn)化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液,，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純。從提取原料到樣品生成過(guò)程中，進(jìn)行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌、無(wú)菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu),。吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）,。

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋,。3條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋,。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部,。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）,。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區(qū),，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。制備鼠尾膠原：吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）。金華正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨

手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的較高,，折斷尾骨后拉出尾腱。南昌鼠尾膠原推薦廠家

鼠尾膠原：1實(shí)驗(yàn)制備：實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料：大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿、三角燒瓶,、燒杯,、量筒、天平、生理鹽水,、75%酒精,、0.1%醋酸溶液、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆、鼠尾膠原,。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1,、制備鼠尾膠原（兩個(gè)同學(xué)一組操作）。2,、切割小玻片,。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),。實(shí)驗(yàn)步驟：制備鼠尾膠原：1,、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘,；2,、手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高,，折斷尾骨后拉出尾腱,；3、將尾腱剪斷置于平皿中,，生理鹽水浸泡,；4、重復(fù)步驟2,、3,，直至尾腱量夠用；5,、吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）。南昌鼠尾膠原推薦廠家