生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,，簡化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純,。從提取原料到樣品生成過程中,，進(jìn)行多次真空冷凍干燥，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌,、無菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,，提高了產(chǎn)率和生物相容性，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料,，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)。不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,。寧波太原鼠尾膠原

一種基于鼠尾膠原蛋白：1.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于凍干止血材料中，各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?%2%1%,，余量的水,。2.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級大鼠鼠尾,。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于劑型為創(chuàng)可貼。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于劑型為噴霧劑,。北京正規(guī)鼠尾膠原鼠尾膠原，是一種細(xì)胞支持物,，它是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成份,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS,，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。注意事項型在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫,。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rattailtendoncollagentypeI）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞,。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境,，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長,。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長,。1mg/ml濃度以上,，pH左右時可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長,、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長,。使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間,。

鼠尾膠原實驗應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果,。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性,，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征,。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法，并且制作簡便,成本低廉,。鼠尾膠原醋酸溶解：制備成濃度為0.1%的溶液,。蕪湖鼠尾膠原銷售廠家

鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,。寧波太原鼠尾膠原

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中,，調(diào)節(jié)pH=6.5,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時,，去除上清液，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀；2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液,，冰水浴中，調(diào)節(jié)PH=6.5;溶液依次通過陽離子交換樹脂,、陰離子交換樹脂進(jìn)行脫鹽處理,；(8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液，-40至-20°C預(yù)凍2?4小時,，然后真空冷凍干燥,，凍干產(chǎn)品經(jīng)進(jìn)一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉，滅菌,、包裝,，得到成品膠原蛋白粉末。寧波太原鼠尾膠原