細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞培養(yǎng),、引種,、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。在細胞建株和建系中,，及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,，雜交瘤細胞,、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是必不可少的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候,，細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染,、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導致實驗失敗，如果沒有原始細胞的凍存,，則因為上述的意外而前功盡棄,。無血清細胞凍存液，含多種保護劑成分。無錫石家莊無血清細胞凍存液

無血清細胞凍存液：1. 逐滴加入5 - 7 mL的預熱的培養(yǎng)基到15 mL的離心管中,，加入的同時輕輕混勻,。2. 室溫（15 - 25°C）以300 x g離心5分鐘。3. 吸出培養(yǎng)基,，使細胞沉淀完好無損,。使用2 mL血清移液管輕輕將細胞沉淀重懸于1 mL的培養(yǎng)基中。小心保持細胞作為聚集體,。4. 將0.5 mL的細胞混合物轉(zhuǎn)移到含有培養(yǎng)基的預包被的6孔板的培養(yǎng)孔中（例如,，每個冷凍管可以鋪板兩個孔）。注意：鋪板多少孔可能需要根據(jù)凍存的細胞聚集體數(shù)量進行調(diào)整,。通常在復蘇后,，要比在常規(guī)的傳代鋪板更多的細胞聚集體數(shù)量。將培養(yǎng)板放入37°C培養(yǎng)箱,?？焖偾昂笞笥业膿u晃培養(yǎng)板數(shù)次，將細胞聚集體分布均勻,。24小時內(nèi)不要移動培養(yǎng)板,。廈門正規(guī)無血清細胞凍存液廠家批發(fā)價鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng),。

無血清細胞凍存液的優(yōu)點有哪些呢：很多所使用的傳統(tǒng)的細胞凍存液的成份主要是：新鮮的培養(yǎng)基,，其中含有10%的胎牛血清和5-10%的DMSO。凍存的方法：將冷凍管置于4℃條件喜愛10分鐘,，接著在-20℃的條件下30分鐘,，-80℃的條件下保存16-18個小時（或隔夜保存也可以），較后再液氮的環(huán)境中進行長期的儲存,。需要注意在-20℃的環(huán)境下保存不可超過1個小時,，主要用以防止冰晶產(chǎn)生過大，造成細胞大量的死亡,。對于無血清的細胞凍存液來說,，其所含有的成分是：不含血清，含DMSO,、pH調(diào)節(jié)劑,、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分等。其中不含有動物來源性的蛋白,，所以能夠減少各類的細菌,、霉菌、支原體等帶來的污染,，而且可以確保凍存細胞的安全,。比較通用于各種動物的細胞株,。

細胞凍存，我們應該注意哪些事項：DMSO快速稀釋會對細胞造成滲透性損傷,，使存活率下降50%,。對于DMSO凍存的細胞，復蘇后應緩慢稀釋成細胞懸液：1）凍存液：培養(yǎng)基=1:1稀釋成細胞懸液后離心,，然后重懸至培養(yǎng)皿中培養(yǎng),，隔天換液；2）凍存液：培養(yǎng)基=1:10稀釋成細胞懸液,，不用離心,，直接放置到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)2-4小時后，換液,。上述兩種方法都是比較常用的細胞復蘇方法,，后者更適用于原代細胞或比較難養(yǎng)的細胞。液氮內(nèi)的細胞凍存較長時間不要超過半年,，凍存在液氮中的細胞應一段時間內(nèi)進行更替,。一個細胞系在培養(yǎng)一個月后，可復蘇一管新的細胞確保其質(zhì)量沒有發(fā)生太大變化,，傳代幾次后,，再凍存留種。血清批次,、品質(zhì)間差異導致凍存液的批次間差異,。

復蘇方：法1）從冰箱里取出細胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍,。2）待凍存管中細胞混合液完全融化后,，立即加入1 ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9 ml該細胞培養(yǎng)基的試管中,，混合均勻,。3）離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000 rpm，4℃,，3~5 min）,，移去上清液。4）清洗細胞,，充分洗凈殘留凍存液,。5）加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液,。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中,。6）鏡檢后,，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng),。含血清，細胞污染(細菌,、霉菌和支原體等)的風險更高,。廈門正規(guī)無血清細胞凍存液廠家批發(fā)價

同時另一些保護劑不能穿透細胞。無錫石家莊無血清細胞凍存液

無血清凍存液通用于各種動物細胞株（tumour細胞和常規(guī)細胞）,，凍存細胞可在-80℃長期保存（>5年）,。配方成分明確，不含動物來源性蛋白,，不含血清,，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染,，保證凍存細胞的安全,。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分,，提高細胞存活率和活力,，亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。該產(chǎn)品添加了細胞沉降穩(wěn)定劑,，可延緩細胞在凍存過程中的沉降速率,，防止細胞互相擠壓，影響細胞凍存效果,。另外,，添加了細胞膜保護劑、滲透性細胞膜內(nèi)保護劑,、非滲透性細胞保護劑等多種冷凍保護劑,，這些成分在溶液中同水分子結(jié)合，發(fā)生水合作用,，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成,，能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷，有效提高細胞復蘇存活率,。該產(chǎn)品配方成分明確,，不含血清、不含動物源性蛋白,，可減少各類細菌,、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全,；不光適用于常規(guī)細胞系,、原代細胞，同時亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞,。無錫石家莊無血清細胞凍存液

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