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膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,,每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋,其中每 3個氨基酸殘基形成一圈螺旋,。3 條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋,。這樣的螺旋稱為 3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部,。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,,這些棒狀分子首尾相連,并側(cè)向排列形成膠原微絲(其直徑可從50埃至數(shù)千埃),。膠原分子在兩端及沿軸向每隔 680埃的距離存在極性區(qū),,這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合,使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,,成本低廉,。鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中。正規(guī)鼠尾膠原廠家
一種基于鼠尾膠原蛋白:1.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,,其特征在于凍干止血材料中,,各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?% 2% 1%,余量的水,。2.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,,其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級大鼠鼠尾。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,,其特征在于劑型為創(chuàng)可貼,。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,其特征在于劑型為噴霧劑,。濟(jì)南正規(guī)鼠尾膠原單價用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL,。
含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置于冰浴中,。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻,。再加入23ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
要準(zhǔn)備的器具:組織剪2把,有齒鑷1把,,無齒鑷1把,,200 ml燒杯1個,培養(yǎng)皿1個,,帶蓋廣口瓶1個,,離心管、小瓶數(shù)個,,滴管若干,。以上物品須經(jīng)嚴(yán)格高壓消毒滅菌。需配制的液體0.1%醋酸溶液,。經(jīng)44.48N10 min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用,。此外還有用消毒雙蒸水配制75%酒精溶液。取大鼠尾巴,,洗凈,,置75%酒精浸泡消毒后,手持尾巴,,用止血鉗夾住尾巴較高,,折斷尾骨后拉出尾腱,將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中,,稱尾腱的重量,,按每克尾腱50ml 的比例加入0.1%醋酸溶液,搖晃,,使尾腱分散于醋酸溶液中,,4℃放置48 小時,離心。吸取其上清,,分裝至小瓶,,4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成,。在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,。
鼠尾膠原的提取步驟:配置含4.5mmol/lNacl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-Hcl溶液(用鹽酸將其PH值調(diào)至7.5) 取鼠尾,去皮,,由尖部向前分段抽取肌腱,,置于生理鹽水中,稱重,,再倒掉生理鹽水,,酒精中浸泡20分鐘 離心膠原溶液,(1200rpm10min) 取上清 每600上述粗提液加100ml0.14mol/l NaOH溶液離心,,(8000rpm 5min) 其上清,,留絮狀沉 10.將絮狀沉淀物置于三蒸水中,用0.1mol/l(1000:6) 醋酸溶解絮狀沉淀物,,加入消毒過的攪拌 子,,冷房攪拌數(shù)天,得絮狀膠原,。 注意所有和膠原有關(guān)的操作都在冰上進(jìn)行\(zhòng) Rat tail collagen type 配置含4.5mmol/L NaCl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-HCl 溶液(用鹽酸將其pH值調(diào)至7.5),; 于-20冰箱中取出鼠尾,浸泡75%或70%酒精,,解凍,; 在一小培養(yǎng)皿中放置少量生理鹽水,置于電子秤上,,調(diào)零,; 取鼠尾,去皮,,由尖部向前分段抽取肌腱,,置于生理鹽水中。鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上,, pH 左右時可形成具有一定強度三維膠,。貴陽鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨
鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。正規(guī)鼠尾膠原廠家
膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,,每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋,,其中每 3個氨基酸殘基形成一圈螺旋。3 條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋,。這樣的螺旋稱為 3股螺旋,。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部,。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,這些棒狀分子首尾相連,,并側(cè)向排列形成膠原微絲(其直徑可從50埃至數(shù)千埃),。膠原分子在兩端及沿軸向每隔 680埃的距離存在極性區(qū),這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合,,使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。正規(guī)鼠尾膠原廠家