許多生物醫(yī)學成像方式,，無論是單光子(共聚焦)或多光子(雙光子),，都使用激光作為光源，并需要兼容的熒光染料,。熒光染料有自己的激發(fā)波長,，它們可以被單個光子以該激發(fā)波長的光子能量激發(fā)(E=hv=h*c/λ);或者是兩個幾乎同時到達的光子，但每個光子的能量約為單光子能量的一半,，即雙波長(0.5E->2λ),。前者是單光子顯微鏡原理,，后者是雙光子顯微鏡原理。在對同一種熒光染料進行成像時,，雙光子與單光子相比可以使用約兩倍波長,，因此雙光子的散射較小(波長較長，散射較小),，可以更深入地滲透到組織中,。由于雙光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源，適用于長時間的研究,。國內investigator雙光子顯微鏡作用

在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收兩個長波長的光子，然后發(fā)射出一個波長較短的光子,，其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的如煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）,，在單光子激發(fā)時，在波長為350 nm光的激發(fā)下發(fā)出450 nm熒光,；而在雙光子激發(fā)時,，可采用700 nm的激發(fā)光得到450 nm熒光。由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，為了不損傷細胞,，雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,，從而可以減少光漂白和光毒性帶來的不利影響,。美國熒光激光雙光子顯微鏡的原理雙光子顯微鏡廠家有哪些？

Itrytoexplainwhytwo-photonmicroscopyhasadeeperimagingdepththanone-photonmicroscopy,intheareaofbiomedicalimaging.Manyofthebiomedicalimagingmodalities,nomatterone-photon(confocal)ormulti-photon(two-photon),uselasersaslightsourceandrequirecompatiblefluorescentdyes.Fluorescentdyeshavetheirownexcitationwavelength,andtheycaneitherbeexcitedbyasinglephotonwiththephotonenergyofthatexcitationwavelength(E=hv=h*c/位);orbytwophotons,arrivingalmostatthesametime,buteachwithapproximatelyhalfoftheenergy,henceofdoublewavelengththanone-photon(0.5E->2位).Theformeristheprincipleofone-photonmicroscopyandthelatteristheprincipleoftwo-photonmicroscopy.Whenimagingthesamefluorescentdye,sincetwo-photoncoulduseapproximatelydoubledwavelengthcomparedwithsingle-photon,two-photoncanobviouslypenetrateddeeperintothetissueduetolessscattering(longerwavelength,lessscattering).

雙光子顯微成像的在生物醫(yī)學研究和醫(yī)療領域應用有較大的應用前景,，首先雙光子顯微鏡能夠進行細胞和組織結構成像,，在亞微米級成像，此功能與目前市場上的共聚焦類顯微鏡性能類似,；雙光子顯微成像能夠實時,、在體、原位,、無創(chuàng)地,，根據(jù)不同物質組份的光譜特性，區(qū)分成像,；雙光子顯微鏡能夠進行生化指標成像,，在無造影劑的前提下，利用自發(fā)熒光,、二次諧波,、熒光獲得活細胞生化信息。雙光子顯微鏡技術在醫(yī)療診斷應用中具有巨大的潛力,，該領域還未形成標準和體系,，需要系統(tǒng)的醫(yī)學研究與龐大的醫(yī)療數(shù)據(jù)加以支撐,，通過研究人體基于多光子成像技術，進行細胞結構,、生化成分、微環(huán)境,、組織形態(tài),、代謝功能的影響信息，找到與疾病的細胞學,、分子生物學,、組織病理學、診斷和***特征的關聯(lián)關系,，共同探究生理病理基礎和分子細胞生物學機制,，篩選鑒定**、皮膚病,、自身免疫病及其他疑難疾病的診斷及鑒別診斷依據(jù),，建立全新的多光子細胞診斷的完整數(shù)據(jù)庫，定義出針對不同疾病的多光子臨床檢測設備的產品標準,。雙光子顯微鏡已延伸到各個領域研究中,，它能對樣品進行三維觀察。

Denk很快就將雙光子顯微鏡用于神經元成像,，而1997年在Svoboda測量完整老鼠大腦的錐體神經元的感官刺激誘導樹突鈣離子動態(tài)后,，雙光子顯微鏡的潛能開始完全凸顯。值得一提的是,，霍華德·休斯醫(yī)學院Svoboda實驗室和Thorlabs在2016年合作推出了一種強大的多光子介觀顯微鏡,，其成像視場達到5毫米，能夠跨多個腦區(qū)進行高速功能成像,。根據(jù)清華大學單一采購來源的**指導意見：這種顯微鏡的視場是普通雙光子顯微鏡的10倍,。30年來，雙光子顯微鏡已成為較厚***生物組織三維成像中不可或缺的工具,。從雙光子到三光子甚至四光子,，這種非線性成像技術通常也被統(tǒng)稱為多光子顯微鏡。下圖統(tǒng)計了自1990年以來每年發(fā)表的多光子顯微鏡文章數(shù)量,，發(fā)展速度可見一斑,。對于顯微成像技術包含：寬場熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡,、轉盤共聚焦顯微鏡,、雙光子顯微鏡。國內investigator雙光子顯微鏡作用

雙光子顯微鏡比單光子共聚焦顯微鏡較大的不同在于無須使用孔限制光學散射,。國內investigator雙光子顯微鏡作用

雙光子顯微鏡為什么穿透能力強,？生物組織在近紅外波段存在兩個窗口,第1個近紅外窗口對應波長在700nm-900nm,第2個近紅外窗口對應波長在1000nm-1400nm之間,。舉例說明就是單晶硅對于可見光幾乎是不透明的，但是對于紅外波段就像是“水晶”一樣通透性很好了,。原因有兩點：1.生物組織對紅外光的吸收弱,，對可見光吸收強。類似的,，平時用手電筒照射手指,，會看到手通透紅亮，也是由于生物組織對長波長的紅光吸收少,。2.生物組織對紅外光的散射弱,。因為瑞利散射的強度反比于波長λ的四次方。類似的,，早晨的太陽非常紅,，也就是因為長波長的紅光穿透力更強。這兩點共同導致長波長的紅外光比可見光對生物組織的穿透能力強,。國內investigator雙光子顯微鏡作用