多光子激發(fā)掃描顯微成像系統(tǒng)的不足。只能對(duì)熒光成像。如果樣品包括能夠吸收激發(fā)光的色團(tuán)，如色素,，樣品可能受到熱損傷,。分辨率略有降低，雖然可以通過(guò)同時(shí)利用共焦的小孔得到改善,，但是信號(hào)會(huì)有損耗。受昂貴的超快激光器限制,，多光子掃描顯微鏡的成本較高,。多光子激發(fā)顯微鏡應(yīng)用舉例。動(dòng)物和腦片神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能,、動(dòng)物腦皮層的成像,、胚胎發(fā)育過(guò)程的長(zhǎng)時(shí)間動(dòng)態(tài)觀測(cè)、多光子激發(fā)光解籠,、細(xì)胞內(nèi)微區(qū)鈣動(dòng)力學(xué),、多光子激發(fā)自發(fā)熒光,、其它應(yīng)用,。從產(chǎn)品類(lèi)型及技術(shù)方面來(lái)看,，正置顯微鏡占據(jù)絕大多數(shù)市場(chǎng),。美國(guó)進(jìn)口多光子顯微鏡Ultima Investigator

現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展和科技的進(jìn)步,，特別是隨著后基因組時(shí)代的到來(lái),，人們已經(jīng)能夠根據(jù)需要建立各種細(xì)胞模型，為在體研究基因表達(dá)規(guī)律、分子間的相互作用,、細(xì)胞的增殖、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、誘導(dǎo)分化、細(xì)胞凋亡以及新的血管生成等提供了良好的生物學(xué)條件。然而,，盡管人們利用現(xiàn)有的分子生物學(xué)方法,，已經(jīng)對(duì)基因表達(dá)和蛋白質(zhì)之間的相互作用進(jìn)行了深入,、細(xì)致的研究,，但仍然不能實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)和基因活動(dòng)的實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),。在細(xì)胞的生理過(guò)程中,，基因、尤其是蛋白質(zhì)的表達(dá),、修飾和相萬(wàn)作用往往發(fā)生可逆的,、動(dòng)態(tài)的變化。目前的分子生物學(xué)方法還不能捕獲到蛋白質(zhì)和基因的這些變化,，但獲取這些信息對(duì)與研究基因的表達(dá)和蛋白質(zhì)之間的相互作用又至關(guān)重要,。因此，發(fā)展能用于,、動(dòng)態(tài),、實(shí)時(shí)、連續(xù)監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)和基因活動(dòng)的方法非常必要,。bruker多光子顯微鏡層析成像光子顯微成像技術(shù)不是什么新技術(shù),，早在20多年前就有了，目前已經(jīng)在生命科學(xué)和材料科學(xué)中廣泛應(yīng)用,。

2020年,，JianglaiWu等人提出提高2PM橫向掃描速率的裝置，稱(chēng)為FACED（free-spaceangular-chirp-enhanceddelay）,。圓柱透鏡將激光束一維聚焦,，會(huì)聚角為Δθ。光束進(jìn)入到一對(duì)幾乎平行的高反射鏡中,，其間距為S,，偏角為α,。經(jīng)過(guò)反射鏡多次反射后，激光脈沖被分成多個(gè)傳播方向不同的子脈沖（N=Δθ/α）,，脈沖間以2S/c的時(shí)間延遲（c,，光速）回射。FACED模塊輸出處的子脈沖序列可以看作從虛擬光源陣列發(fā)出的光,，這些子脈沖在中繼到顯微鏡物鏡后形成了一個(gè)空間上分離且時(shí)間延遲的焦點(diǎn)陣列,。然后將該模塊并入具有高速數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)雙光子熒光顯微鏡中。光源是具有1MHz重復(fù)頻率的920nm的激光器,，通過(guò)FACED模塊可產(chǎn)生80個(gè)脈沖焦點(diǎn),，其脈沖時(shí)間間隔為2ns。這些焦點(diǎn)是虛擬源的圖像,，虛擬源越遠(yuǎn),，物鏡處的光束尺寸越大，焦點(diǎn)越小,。光束沿y軸比x軸能更好地充滿(mǎn)物鏡,，從而導(dǎo)致x軸的橫向分辨率為0.82μm，y軸的橫向分辨率為0.35μm,。

    神經(jīng)科學(xué)重要的研究工具-多光子顯微鏡作為神經(jīng)科學(xué)重要的研究工具,，近年來(lái)發(fā)展快速，品牌也眾多,。我們通常都是在一間開(kāi)著冷氣的房間里的超大防震臺(tái)上見(jiàn)過(guò)這樣一套設(shè)備,。臺(tái)面上復(fù)雜的光路也讓我們?cè)谑褂弥行⌒囊硪恚屡獕牧四睦锒鵁o(wú)從修復(fù),。你是否想象過(guò)一臺(tái)放在書(shū)桌邊上就能使用的多光子顯微鏡,，一臺(tái)跟普通顯微鏡一樣操作簡(jiǎn)便的多光子顯微鏡，一臺(tái)不用擔(dān)心會(huì)碰壞的多光子顯微鏡,，一臺(tái)可以在不同實(shí)驗(yàn)室之間搬來(lái)搬去的多光子顯微鏡,，一臺(tái)可以從任意角度進(jìn)行觀察掃描的多光子顯微鏡？滔博生物TOP-Bright是一家集研發(fā),，生產(chǎn),，銷(xiāo)售于一體的專(zhuān)注于神經(jīng)科學(xué)產(chǎn)品及致力于向高校、科研機(jī)構(gòu)等領(lǐng)域提供實(shí)驗(yàn)室一體化方案的高科技企業(yè),。業(yè)務(wù)服務(wù)范圍已遍布至全國(guó)各地幾百家實(shí)驗(yàn)室,。目前公司主營(yíng)產(chǎn)品是享譽(yù)全球的國(guó)際品牌和產(chǎn)品,這些儀器設(shè)備都是科學(xué)研究所必備且不可替代的基礎(chǔ)儀器。 多光子激光掃描顯微鏡更能解決生物組織中深層物質(zhì)的層析成像問(wèn)題, 擴(kuò)大了應(yīng)用范圍,。

針對(duì)雙光子熒光顯微鏡的特點(diǎn),，從理論上分析雙光子成像特點(diǎn)，并搭建一套時(shí)間,、空間分辨率高,，能實(shí)時(shí),、動(dòng)態(tài)、多參數(shù)測(cè)量的雙光子熒光顯微鏡系統(tǒng),。具體系統(tǒng)應(yīng)實(shí)現(xiàn)∶（1）能對(duì)不同染料的雙光子熒光進(jìn)行探測(cè);（2）用特定染料對(duì)樣品標(biāo)記以后,，能實(shí)現(xiàn)雙光子熒光的三維成像;（3）通過(guò)實(shí)驗(yàn)的研究,，改進(jìn)雙光子熒光顯微成像系統(tǒng);（4）在保證成像質(zhì)量的前提下,，簡(jiǎn)化整個(gè)系統(tǒng)，使得實(shí)驗(yàn)操作方便,、安全,。單光子激發(fā)熒光的過(guò)程，就是熒光分子吸收一個(gè)光子,，從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài),，躍遷以后，能量較大的激發(fā)態(tài)分子,，通過(guò)內(nèi)轉(zhuǎn)換把部分能量轉(zhuǎn)移給周?chē)姆肿?，自己回到比較低電子激發(fā)態(tài)的比較低振動(dòng)能級(jí)。處于比較低電子激發(fā)態(tài)的比較低振動(dòng)能級(jí)像在生物醫(yī)學(xué)光學(xué)成像研究中顯示了較大的優(yōu)勢(shì),。而在顯微成像中,，雙光子熒光顯微鏡憑其獨(dú)有的優(yōu)點(diǎn)，成為研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能檢測(cè)的重要工具,。多光子顯微鏡可以進(jìn)行深層成像,，且具有三維成像的能力,，可以應(yīng)用于拍攝不透明的厚樣品。激光掃描多光子顯微鏡方案

多光子顯微鏡技術(shù)的優(yōu)勢(shì)如何,？又有哪些應(yīng)用,？美國(guó)進(jìn)口多光子顯微鏡Ultima Investigator

多光子顯微鏡對(duì)成像深度的改善利用紅光或紅外光激發(fā)，光散射?。ㄐ×Ｗ拥纳⑸渑c波長(zhǎng)的四次方的成反比）,。不需要***，能更多收集來(lái)自成像截面的散射光子,。***不能區(qū)分由離焦區(qū)域或焦點(diǎn)區(qū)發(fā)射出的散射光子,，多光子在深層成像信噪比好。單光子激發(fā)所用的紫外或可見(jiàn)光在光束到達(dá)焦平面之前易被樣品吸收而衰減,，不易對(duì)深層激發(fā),。多光子熒光成像的特點(diǎn)。深度成像∶與共聚焦相比能更好地對(duì)厚散射物質(zhì)成像,。信噪比∶多光子吸收采用的波長(zhǎng)是單光子吸收的2倍以上,，所以顯微試樣中的瑞利散射更小,，熒光測(cè)定的信噪比更高。觀察活細(xì)胞∶離子測(cè)量（i.e.Ca2+）,，GFP,，發(fā)育生物學(xué)等—減少了光毒性和光漂白，能對(duì)細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間觀察,。美國(guó)進(jìn)口多光子顯微鏡Ultima Investigator