不論采用哪一類鈣離子指示劑,，總體上成像記錄過(guò)程是非常類似的,。包含鈣離子指示劑的細(xì)胞可以通過(guò)熒光顯微鏡(fluorescencemicroscope)觀測(cè)，然后通過(guò)CCD攝像機(jī)捕捉、記錄圖像?，F(xiàn)在鈣成像技術(shù)主要在以下幾類神經(jīng)科學(xué)研究方面有廣泛應(yīng)用：1.記錄培養(yǎng)的神經(jīng)元的活動(dòng),。2.記錄腦片上神經(jīng)元的活動(dòng),。記錄神經(jīng)元的活動(dòng),。由于離體實(shí)驗(yàn)本身的限制,，現(xiàn)在越來(lái)越多的神經(jīng)方面科學(xué)家傾向于做在體鈣成像實(shí)驗(yàn),，希望能得到更準(zhǔn)確且更能反應(yīng)生理狀況的數(shù)據(jù)。得益于雙光子熒光顯微鏡的發(fā)展,，現(xiàn)在在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處于huoti狀態(tài)下的鈣成像技術(shù)取得了飛速進(jìn)展,。4.記錄神經(jīng)元樹(shù)突和樹(shù)突棘（spine）的活動(dòng)。由于對(duì)于實(shí)驗(yàn)精度的要求,，有些科學(xué)家不僅只想記錄單個(gè)神經(jīng)元的反應(yīng),，他們還想更確切地知道神經(jīng)元上哪些樹(shù)突和樹(shù)突棘參與了某個(gè)行為，也就是說(shuō)他們需要在huoti條件下,，對(duì)單根樹(shù)突以及某些spine進(jìn)行鈣成像記錄實(shí)驗(yàn),。由于雙光子熒光顯微鏡和GCaMP6基因編碼鈣離子指示劑的發(fā)展，現(xiàn)在,，對(duì)樹(shù)突和樹(shù)突棘用鈣成像實(shí)驗(yàn)進(jìn)行記錄也成為了可能,。超微顯微鈣成像顯微鏡是研究活動(dòng)動(dòng)物神經(jīng)活動(dòng)必要儀器。美國(guó)光遺傳鈣成像什么價(jià)格

CaMPARI,，一種能夠兼顧全局和微觀的新型鈣成像技術(shù)，包含CaMPARI以及CaMPARI2（第二代）,。其原理在于,，CaMPARI蛋白在正常狀態(tài)下會(huì)發(fā)出綠色熒光，而如果對(duì)這種蛋白同時(shí)使用高濃度鈣離子與紫外光處理,，它就會(huì)不可逆,、長(zhǎng)久地轉(zhuǎn)變成另一種能發(fā)出紅色熒光的構(gòu)象，即實(shí)現(xiàn)將瞬間的神經(jīng)元活動(dòng)變成長(zhǎng)久的紅色熒光蛋白表達(dá),。研究人員通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)將這種新型蛋白導(dǎo)入到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)中,，然后用度的紫外光照射動(dòng)物的大腦，通過(guò)檢查熒光,，找到發(fā)紅色熒光的神經(jīng)元,，這些神經(jīng)元即是在紫外光照射期間活躍的神經(jīng)元。由于紫外光可以對(duì)著整個(gè)大腦進(jìn)行照射,，所以理論上,，人們可以對(duì)全腦進(jìn)行檢查。浙江熒光鈣成像nVoke2.0雙光子熒光顯微鏡的發(fā)展,，使在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處于活動(dòng)狀態(tài)下的鈣成像技術(shù)取得了飛速進(jìn)展,。

哥倫比亞大學(xué)ZuckermanMind大腦行為研究所的RuiM.Costa課題組于2020年10月7日在Cell雜志上發(fā)表了一篇題為AnAmygdalaCircuitMediatesExperience-DependentMomentaryArrestsduringExploration的文章，作者開(kāi)發(fā)一種用于研究小鼠探索活動(dòng)中瞬時(shí)停滯行為機(jī)制的新型實(shí)驗(yàn),，通過(guò)行為分析,、環(huán)路映射,、滔博生物-Inscopix自由活動(dòng)鈣成像顯微鏡結(jié)合光遺傳學(xué)手段，提供介導(dǎo)經(jīng)驗(yàn)依賴性的瞬時(shí)停滯行為的BLA神經(jīng)元群體的jihuo和投射證據(jù),，表明BLA-CEA環(huán)路可以作為新穎/熟悉情境的檢測(cè)器和效應(yīng)器,，用于基于空間位置的熟悉程度來(lái)生成自定進(jìn)度的行為停滯，這一響應(yīng)對(duì)于動(dòng)物對(duì)未知環(huán)境進(jìn)行安全有效的探索是至關(guān)重要的,。

鈣成像的熒光指示劑鈣成像的熒光探針一般均為Ca2螯合劑EGTA,，APTRA，BAPTA的衍生物,，它們可以結(jié)合鈣離子從而顯示一個(gè)光譜響應(yīng),，使研究者可以用熒光顯微鏡來(lái)觀察細(xì)胞內(nèi)的自由鈣的濃度。熒光顯微鏡可以使用普通的倒置熒光顯微鏡來(lái)進(jìn)行鈣信號(hào)的測(cè)定和成像,。并可結(jié)合電生理設(shè)備,、活細(xì)胞培養(yǎng)裝置等，適用于大強(qiáng)度,、廣范圍的鈣信號(hào)測(cè)定,。共聚焦顯微系統(tǒng)，共聚焦以激光為光源,，且可配備氬離子光源,，可以選擇可見(jiàn)光激發(fā)的鈣指示劑，進(jìn)行層掃,，相比普通熒光顯微鏡有更好的空間分辨率,。并且共聚焦除了配備大視野掃描鏡更可配置共振掃描振鏡，以滿足更高速成像應(yīng)用的需求,。雙光子顯微系統(tǒng)使用長(zhǎng)波長(zhǎng)來(lái)激發(fā)熒光指示劑,，具有較低的細(xì)胞毒性，也可適用于紫外激發(fā)的鈣指示劑,，且可獲得和單光子共聚焦系統(tǒng)類似的空間分辨率,。小結(jié)綜上可見(jiàn)，在研究鈣信號(hào)時(shí),，可結(jié)合樣品自身特點(diǎn)來(lái)選擇相應(yīng)的鈣指示劑,，并考慮既有的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，來(lái)確定具體的實(shí)驗(yàn)方案,。同時(shí)還需進(jìn)一步摸索實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的校正,、控制等多種影響因素，可獲得可靠的圖像及熒光定量數(shù)據(jù),。鈣成像系統(tǒng)集成自動(dòng)控制和精確計(jì)時(shí)的多模式輸入端口,。

利用鈣成像技術(shù)記錄大腦活動(dòng)，隨著功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展,，神經(jīng)學(xué)家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況,。功能鈣成像技術(shù)就是其中之一,，其主要原理是將外源性熒光信號(hào)和生理現(xiàn)象耦合起來(lái)——通過(guò)熒光染料信號(hào)的改變反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度，以此細(xì)胞的功能狀態(tài),。目前它被廣泛應(yīng)用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)一群相關(guān)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,，從而判斷其功能活動(dòng)。該技術(shù)的出現(xiàn)使得科學(xué)家可以親眼目睹神經(jīng)信號(hào)在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)之中時(shí)間和空間上的傳遞穿梭,。鈣成像技術(shù)在神經(jīng)科學(xué)研究中的應(yīng)用,。美國(guó)光遺傳鈣成像什么價(jià)格

鈣信號(hào)在大腦皮層中更能反映神經(jīng)元的活性,因此神經(jīng)元鈣信號(hào)的檢測(cè)對(duì)研究大腦皮層功能至關(guān)重要。美國(guó)光遺傳鈣成像什么價(jià)格

細(xì)胞內(nèi)鈣離子作為重要的信號(hào)分子其作用具有時(shí)間性和空間性,。當(dāng)di 1個(gè)細(xì)胞興奮時(shí),，產(chǎn)生了一個(gè)電沖動(dòng)，此時(shí),，細(xì)胞外的鈣離子流入該細(xì)胞內(nèi),，促使該細(xì)胞分泌神經(jīng)遞質(zhì)，神經(jīng)遞質(zhì)與相鄰的下一級(jí)神經(jīng)細(xì)胞膜上的蛋白分子結(jié)合,，促使這一級(jí)神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生新的電沖動(dòng),。以此類推，神經(jīng)信號(hào)便一級(jí)一級(jí)地傳遞下去,，從而構(gòu)成復(fù)雜的信號(hào)體系,，*終形成學(xué)習(xí)、記憶等大腦的高級(jí)功能,。在哺乳動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)中,，鈣離子同樣扮演著重要的信號(hào)分子的角色。靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度約為50-100nM,，而細(xì)胞興奮時(shí)鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍，增加的鈣離子對(duì)于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質(zhì)的過(guò)程必不可少,。眾所周知,，只有游離鈣才具有生物學(xué)活性，而細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定,，同時(shí)也受鈣結(jié)合蛋白的影響,。細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種，其中包括電壓門(mén)控鈣離子通道,、離子型谷氨酰胺受體,、煙堿型膽堿能受體（nAChR）和瞬時(shí)受體電位C型通道（TRPC）等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過(guò)熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來(lái),，以反映神經(jīng)元活性,。該方法可以同時(shí)觀察多個(gè)功能或位置相關(guān)的腦細(xì)胞。美國(guó)光遺傳鈣成像什么價(jià)格

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