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美國(guó)全細(xì)胞膜片鉗電生理技術(shù)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-02-14

ePatch的設(shè)計(jì)的一些亮點(diǎn)還包括:可以在軟件中伴隨數(shù)據(jù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)記錄,,你不用再專(zhuān)門(mén)拿一個(gè)實(shí)驗(yàn)記錄本了,,也不用再擔(dān)心本本上記錄的內(nèi)容找不到對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)了,系統(tǒng)會(huì)把他們一一對(duì)應(yīng)起來(lái),。電壓電流刺激模式的編輯更為傻瓜,,眾多的模塊,直接拖拽就可以,,還伴隨著示例圖,,讓你對(duì)你編輯的程序一目了然。實(shí)時(shí)的全細(xì)胞參數(shù)估算,,包括封接電阻,,膜電容,膜電阻等重要參數(shù)強(qiáng)大的在線分析功能,,包括電壓鉗模式下的I/V graph,,event detection,,F(xiàn)FT,以及電流鉗模式下的AP threshold detection,,AP frequency,,AP slope等數(shù)據(jù)可保存成多種格式,你要是個(gè)程序達(dá)人,,可以支持使用Matlab進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,,如果沒(méi)有這樣的經(jīng)驗(yàn)也沒(méi)有問(wèn)題,數(shù)據(jù)可以保存成.abf用的Clampfit直接分析,。離子通道是一種特殊的膜蛋白,,它橫跨整個(gè)膜結(jié)構(gòu),是細(xì)胞內(nèi)部與部外聯(lián)系的橋梁和細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換的孔道,。美國(guó)全細(xì)胞膜片鉗電生理技術(shù)

美國(guó)全細(xì)胞膜片鉗電生理技術(shù),膜片鉗

現(xiàn)在這塊全新的芯片被放置在了跟前置放大器大小類(lèi)似的小盒子中,,便成就了這款全球較小的膜片鉗放大器ePatch。體積大幅縮減只是一個(gè)表面,,由于細(xì)胞電信號(hào)在被電極記錄到后,,直接進(jìn)入了芯片,以較短的路徑直接從模擬信號(hào)轉(zhuǎn)變成了數(shù)字信號(hào),,在很大程度上減少了環(huán)境及電路噪音對(duì)信號(hào)的影響,,所以這款放大器便可以輕易獲取非常高質(zhì)量且穩(wěn)定的電生理信號(hào)。ePatch體積只為42*18*78mm,,重量200g,,整套設(shè)備的大小只相當(dāng)于傳統(tǒng)膜片鉗設(shè)備的前置放大器,可以輕松地放入衣服口袋,。用USB接口連接電腦后即可使用,,無(wú)需額外電源,連接和使用都極為簡(jiǎn)便,。沒(méi)有了占地方的放大器,,數(shù)模轉(zhuǎn)換器以及相互連接的眾多電線,電源線等等,,我們的膜片鉗又進(jìn)一步減小了體積,。可升級(jí)膜片鉗報(bào)價(jià)細(xì)胞是動(dòng)物和人體的基本組成單元,,細(xì)胞與細(xì)胞內(nèi)的通信,是依靠其膜上的離子通道進(jìn)行的,。

美國(guó)全細(xì)胞膜片鉗電生理技術(shù),膜片鉗

在形成高阻抗封接后,記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果之前,,通常要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求進(jìn)行參數(shù)補(bǔ)償,,以期獲得符合實(shí)際的結(jié)果。需要注意的是,應(yīng)恰當(dāng)設(shè)置放大器的帶寬,,例如10kHz,,這樣在電流監(jiān)測(cè)端將觀察不到超越此頻帶以外的無(wú)用信息。膜片鉗實(shí)驗(yàn)難度大,、技術(shù)要求高,,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,,經(jīng)過(guò)處理和分析,,得出有意義、有價(jià)值的結(jié)果和結(jié)論,,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問(wèn)題,,包括減少噪音,,避免電極前端的污染,提高封接成功率,,具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還需要考慮如何選取記錄模式,,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,,如何選擇阻斷劑,、激動(dòng)劑,如何進(jìn)行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問(wèn)題,,還需在科研實(shí)踐中不斷地探索和解決,。

1976年德國(guó)馬普生物物理化學(xué)研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時(shí),記錄到ACh的單通道離子電流,,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù),。1980年Sigworth等在記錄電極內(nèi)施加5-50cmH2O的負(fù)壓吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),,明顯降低了記錄時(shí)的噪聲實(shí)現(xiàn)了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破,。1981年Hamill和Neher等對(duì)該技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn),引進(jìn)了膜片游離技術(shù)和全細(xì)胞記錄技術(shù),,從而使該技術(shù)更趨完善,,具有1pA的電流靈敏度、1μm的空間分辨率和10μs的時(shí)間分辨率,。1983年10月,,《Single-ChannelRecording》一書(shū)問(wèn)世,奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑,。Sakmann和Neher也因其杰出的工作和突出貢獻(xiàn),,榮獲1991年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng)。膜片鉗80%的工夫在于刺備細(xì)胞。

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對(duì)電極持續(xù)施加一個(gè)1mV,、10~50ms的階躍脈沖刺激,,電極入水后電阻約4~6MΩ,此時(shí)在計(jì)算機(jī)屏幕顯示框中可看到測(cè)試脈沖產(chǎn)生的電流波形,。開(kāi)始時(shí)增益不宜設(shè)得太高,,一般可在1~5mV/pA,以免放大器飽和,。由于細(xì)胞外液與電極內(nèi)液之間離子成分的差異造成了液結(jié)電位,,故一般電極剛?cè)胨畷r(shí)測(cè)試波形基線并不在零線上,須首先將保持電壓設(shè)置為0mV,,并調(diào)節(jié)“電極失調(diào)控制“使電極直流電流接近于零,。用微操縱器使電極靠近細(xì)胞,當(dāng)電極前列與細(xì)胞膜接觸時(shí)封接電阻指示Rm會(huì)有所上升,,將電極稍向下壓,,Rm指示會(huì)進(jìn)一步上升。通過(guò)細(xì)塑料管向電極內(nèi)稍加負(fù)壓,,細(xì)胞膜特性良好時(shí),,Rm一般會(huì)在1min內(nèi)快速上升,直至形成GΩ級(jí)的高阻抗封接,。一般當(dāng)Rm達(dá)到100MΩ左右時(shí),,電極前列施加輕微負(fù)電壓(-30~-10mV)有助于GΩ封接的形成。此時(shí)的現(xiàn)象是電流波形再次變得平坦,,使電極超極化由-40到-90mV,,有助于加速形成封接。為證實(shí)GΩ封接的形成,,可以增加放大器的增益,,從而可以觀察到除脈沖電壓的首尾兩端出現(xiàn)電容性脈沖前列電流之外,電流波形仍呈平坦?fàn)?。不同的全自?dòng)膜片鉗技術(shù)所采用的原理也不完全相同,。全細(xì)胞膜片鉗報(bào)價(jià)

Neher創(chuàng)膜片鉗的膜電容檢測(cè)與碳纖電極電化學(xué)檢測(cè)聯(lián)合運(yùn)用的技術(shù)。美國(guó)全細(xì)胞膜片鉗電生理技術(shù)

這一設(shè)計(jì)模式似乎幾十年都沒(méi)有改變過(guò),,作為一個(gè)有著近20年膜片鉗經(jīng)驗(yàn)的科研工作者,,記得自己進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室次看到的放大器就差不多是這樣,也不覺(jué)得還會(huì)有什么變化,。直到筆者在19年訪問(wèn)歐洲的一個(gè)同樣做電生理的實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候,,發(fā)現(xiàn)了這樣一款獨(dú)特的放大器,讓筆者眼前一亮,,這款放大器從前置放大器出來(lái)的線竟然就直接連接在了電腦上,,當(dāng)筆者問(wèn)他們放大器和數(shù)模呢,?他們說(shuō),你看到的就是全部了,,所以的部件都包含在了這個(gè)前置放大器中,。美國(guó)全細(xì)胞膜片鉗電生理技術(shù)

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