高阻密封技術(shù)還***降低了電流記錄的背景噪聲,,從而大幅提高了時間、空間和電流分辨率,,如10μs的時間分辨率,、1平方微米的空間分辨率和10-12年的電流分辨率。影響電流記錄分辨率的背景噪聲不僅來自膜片鉗放大器本身,,還來自信號源的熱噪聲,。信號源就像一個簡單的電阻,其熱噪聲為σn=4Kt△f/R其中σn為電流均方差的平方根,,k為玻爾茲曼常數(shù),,t為溫度,△f為測量帶寬,,R為電阻值,。可以看出,,為了獲得低噪聲電流記錄,信號源的內(nèi)阻必須非常高,。如果在1kHz帶寬,、10%精度的條件下記錄1pA的電流,信號源的內(nèi)阻應(yīng)該大于2gω,。電壓鉗技術(shù)只能測量內(nèi)阻為100kω~50mω的大電池的電流,,常規(guī)技術(shù)和制備無法達(dá)到所需的分辨率。膜電位Vm由高輸入阻抗的電壓跟隨器所測量,。雙分子層膜片鉗電生理工具
電壓鉗的缺點(diǎn)∶電壓鉗技術(shù)目前主要用于巨火細(xì)胞的全細(xì)胞電流研究,,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮其它技術(shù)不能替代的作用。但也有其致命的弱點(diǎn)1,、微電極需刺破細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,,以致造成細(xì)胞漿流失,破壞了細(xì)胞生理功能的完整性;2,、不能測定單一通道電流,。因為電壓鉗制的膜面積很大,包含著大量隨機(jī)開放和關(guān)閉著的通道,,而且背景噪音大,,往往掩蓋了單一通道的電流。3,、對體積小的細(xì)胞(如哺乳類***元,,直徑在10-30μm之間)進(jìn)行電壓鉗實(shí)驗,技術(shù)上有更大的困難。由于電極需插入細(xì)胞,,不得不將微電極的前列做得很細(xì),,如此細(xì)的前列致使電極阻抗很大,常常是60~-8OMΩ或120~150MΩ(取決于不同的充灌液),。這樣大的電極阻抗不利于作細(xì)胞內(nèi)電流鉗或電壓鉗記錄時在短時間(0.1μs)內(nèi)向細(xì)胞內(nèi)注入電流,,達(dá)到鉗制膜電壓或膜電流之目的。再者,,在小細(xì)胞上插入的兩根電極可產(chǎn)生電容而降低測量電壓電極的反應(yīng)能力,。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊,7*43小時隨時人工在線咨詢.德國細(xì)胞膜片鉗技術(shù)離子和離子通道是細(xì)胞興奮的基礎(chǔ),亦即產(chǎn)生生物電信號的基礎(chǔ),,生物電信號通常用電學(xué)或電子學(xué)方法進(jìn)行測量,。
細(xì)胞是動物和人體的基本組成單元,細(xì)胞與細(xì)胞內(nèi)的通信,是依靠其膜上的離子通道進(jìn)行的,,離子和離子通道是細(xì)胞興奮的基礎(chǔ),,亦即產(chǎn)生生物電信號的基礎(chǔ),生物電信號通常用電學(xué)或電子學(xué)方法進(jìn)行測量,。由此形成了一門細(xì)胞學(xué)科———電生理學(xué)(electrophysiology),,即是用電生理的方法來記錄和分析細(xì)胞產(chǎn)生電的大小和規(guī)律的科學(xué)。早期的研究多使用雙電極電壓鉗技術(shù)作細(xì)胞內(nèi)電活動的記錄?,F(xiàn)代膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,。
膜片鉗技術(shù)與其他技術(shù)的結(jié)合Neher等**將膜片鉗技術(shù)與Fura2熒光鈣測量技術(shù)相結(jié)合,同時進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度,、細(xì)胞膜離子通道電流,、細(xì)胞膜電容等多項指標(biāo)變化的快速交替測量,從而獲得同一事件過程中各因素的各自變化,,進(jìn)而分析這些變化之間的關(guān)系,。Neher將能夠光解鈣離子的鈣螯合物引入膜片鉗技術(shù),進(jìn)而可以定量研究鈣離子濃度與分泌速率的關(guān)系以及相對較大的分泌速率,。他還發(fā)明了膜片鉗的膜電容檢測與碳纖維電極的電化學(xué)檢測相結(jié)合的技術(shù),。然后***將光電聯(lián)合檢測技術(shù)和碳纖維電極電化學(xué)檢測技術(shù)相結(jié)合。這種結(jié)合既能研究分泌機(jī)制,,又能鑒定分泌物質(zhì),,彌補(bǔ)了各單一方法的不足。Eberwine于1991年***將膜片鉗技術(shù)與RT-PCR技術(shù)相結(jié)合,,可以在分子水平上解釋形態(tài)相似但電活動不同的結(jié)果,,隨后開始了膜片鉗與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的時代:基因重組技術(shù)和膜通道蛋白重建技術(shù)。不同的全自動膜片鉗技術(shù)所采用的原理也不完全相同,。
膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同,;②電位固定的細(xì)胞膜面積不同,進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同,。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變,,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況,。因此只能用來研究整個細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動,。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用,。該技術(shù)的主要缺陷是必須在細(xì)胞內(nèi)插入兩個電極,,對細(xì)胞損傷很大,在小細(xì)胞如元,,就難以實(shí)現(xiàn),,又因細(xì)胞形態(tài)復(fù)雜,很難保持細(xì)胞膜各處生物特性的一致,。膜片鉗放大器系統(tǒng)包括三個成分:膜片鉗放大器,、數(shù)模模數(shù)轉(zhuǎn)換器、采集分析軟件,,我們俗稱三件套,。日本全細(xì)胞膜片鉗高阻抗封接
在細(xì)胞膜的電學(xué)模型中,膜電容和膜電導(dǎo)構(gòu)成了一個并聯(lián)回路,。雙分子層膜片鉗電生理工具
電壓鉗的缺點(diǎn):目前電壓鉗技術(shù)主要用于研究巨火細(xì)胞的全細(xì)胞電流,,特別是在分子克隆卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中,發(fā)揮著不可替代的作用,。然而,,它也有其致命的弱點(diǎn):1,。微電極需要刺穿細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,,導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)丟失,破壞細(xì)胞生理功能的完整性,;2,、不能確定單通道電流。由于電壓鉗位薄膜面積大,,包含大量隨機(jī)開關(guān)的通道,,背景噪聲大,往往會掩蓋單通道的電流,。3.在小細(xì)胞(如直徑10-30μm的哺乳動物細(xì)胞)上進(jìn)行電壓鉗實(shí)驗,,技術(shù)難度更大。因為電極需要插入到細(xì)胞中,,所以微電極的前端必須做得非常薄,。如此薄的前端導(dǎo)致電極阻抗較大,,往往為60~-80mω或120~150MΩ(視灌注液不同而定)。如此大的電極阻抗,,不利于用細(xì)胞內(nèi)電流鉗或電壓鉗記錄時,,短時間(0.1μs)內(nèi)將電流注入細(xì)胞,從而達(dá)到鉗制膜電壓或膜電流的目的,。此外,,插在小電池上的兩個電極會產(chǎn)生電容并降低電壓測量電極的反應(yīng)能力。雙分子層膜片鉗電生理工具