我們要指出的是,，單光子激發(fā)熒光和雙光子激發(fā)熒光，是從熒光產生的機理上來區(qū)分的,。而共焦則是熒光顯微鏡的一種結構,，其目的是為了，通過共焦結構,，提高整個熒光顯微鏡的空間分辨率,。所以共焦熒光顯微鏡可以根據激發(fā)光源的不同，實現單光子共焦熒光成像或者雙光子共焦熒光成像,。往往一個普通的雙光子熒光顯微鏡（沒有共焦結構）其空間分辨率也可以達到單光子共焦熒光顯微鏡的水平,。這樣就可以簡化整個系統(tǒng)，相對來說,，就提高了激發(fā)光源的利用率,，以及熒光的探測效率，這個也是我們提倡雙光子熒光成像的原因之一,。雙光子熒光共焦顯微鏡由于雙光子效應和共焦結構,，分辨率則會更高，而我們通常說的共焦顯微鏡都是指單光子激發(fā)熒光的,。光子顯微鏡是一種使用可見光或近紅外光的顯微鏡,。布魯克多光子顯微鏡成像區(qū)域

   與傳統(tǒng)的單光子寬場熒光顯微鏡相比，多光子顯微鏡(MPM)具有光學切片和深度成像的功能,，極大地促進了研究人員對整個大腦深部神經的認識,。2019年，JeromeLecoq等從腦深部神經元成像,、大數量神經元成像,、高速神經元成像三個方面討論了相關的MPM技術。為了將神經元活動與復雜行為聯系起來,，通常需要對大腦皮層深處的神經元進行成像,，這就要求MPM具備深度成像的能力。激發(fā)光和發(fā)射光會被生物組織高度散射和吸收,，這是限制MPM成像深度的主要因素,。雖然增加激光強度可以解決散射問題，但會帶來其他問題，如燒焦樣品,、散焦和近表面熒光激發(fā),。增加MPM成像深度的比較好方法是使用更長的波長作為激發(fā)光。另外,，對于雙光子（2P）成像而言,，離焦和近表面熒光激發(fā)是兩個比較大的深度限制因素，而對于三光子（3P）成像這兩個問題大大減小,，但是三光子成像由于熒光團的吸收截面比2P要小得多,，所以需要更高數量級的脈沖能量才能獲得與2P激發(fā)的相同強度的熒光信號。美國多光子顯微鏡準確定位多光子顯微鏡,，提高醫(yī)學病理診斷的準確性和效率,。

    現代分子生物學技術的迅速發(fā)展和科技的進步，特別是隨著后基因組時代的到來,，人們已經能夠根據需要建立各種細胞模型,，為在體研究基因表達規(guī)律、分子間的相互作用,、細胞的增殖,、細胞信號轉導、誘導分化,、細胞凋亡以及新的血管生成等提供了良好的生物學條件,。然而，盡管人們利用現有的分子生物學方法,，已經對基因表達和蛋白質之間的相互作用進行了深入,、細致的研究，但仍然不能實現對蛋白質和基因活動的實時,、動態(tài)監(jiān)測,。在細胞的生理過程中，基因,、尤其是蛋白質的表達、修飾和相萬作用往往發(fā)生可逆的,、動態(tài)的變化,。目前的分子生物學方法還不能捕獲到蛋白質和基因的這些變化，但獲取這些信息對與研究基因的表達和蛋白質之間的相互作用又至關重要,。因此,，發(fā)展能用于、動態(tài),、實時,、連續(xù)監(jiān)測蛋白質和基因活動的方法非常必要。

    細胞在受到外界刺激時，隨著刺激時間的增長,，即使刺激繼續(xù)存在,，Ca2+熒光信號不但不會繼續(xù)增強，反而會減弱,，直至恢復到未加刺激物時的水平,。對于細胞受精過程中Ca2+熒光信號的變化情況，研究發(fā)現,，配了在粘著過程中,，Ca2+熒光信號未發(fā)生任何變化，而配子之間發(fā)生融合作用時,，Ca2+熒光信號強度卻會出現一個不穩(wěn)定的峰值,，并可持續(xù)幾分鐘。這些現象,，對研究受精發(fā)育的早期信號及Ca2+在卵細胞和受精卵的發(fā)育過程中的作用具有重要的意義,。在其它一些生理過程如細胞分裂、胞吐作用等,，Ca2+熒光信號強度也會發(fā)生很的變化,。多光子顯微鏡-適用于各行各業(yè)的觀察需求。

現代分子生物學技術的迅速發(fā)展和科技的進步,，特別是隨著后基因組時代的到來,，人們已經能夠根據需要建立各種細胞模型，為在體研究基因表達規(guī)律,、分子間的相互作用,、細胞的增殖、細胞信號轉導,、誘導分化,、細胞凋亡以及新的血管生成等提供了良好的生物學條件。然而,，盡管人們利用現有的分子生物學方法,，已經對基因表達和蛋白質之間的相互作用進行了深入,、細致的研究,，但仍然不能實現對蛋白質和基因活動的實時、動態(tài)監(jiān)測,。在細胞的生理過程中,，基因、尤其是蛋白質的表達,、修飾和相萬作用往往發(fā)生可逆的,、動態(tài)的變化,。目前的分子生物學方法還不能捕獲到蛋白質和基因的這些變化，但獲取這些信息對與研究基因的表達和蛋白質之間的相互作用又至關重要,。因此,，發(fā)展能用于、動態(tài),、實時,、連續(xù)監(jiān)測蛋白質和基因活動的方法非常必要。多光子顯微鏡,，為材料科學研究和工業(yè)應用提供全新視角,。美國進口多光子顯微鏡單分子成像定位

精確觀測生物分子相互作用，多光子顯微鏡推動生命科學研究發(fā)展,。布魯克多光子顯微鏡成像區(qū)域

Ca2+是重要的第二信使,，對于調節(jié)細胞的生理反應具有重要的作用，開發(fā)和利用雙光子熒光顯微成像技術對Ca2+熒光信號進行觀測,，可以從某些方面對有機體或細胞的變化機制進行分析,，具有重要的意義。利用雙光子熒光顯微成像技術可以觀察細胞內用熒光探針標記的Ca2*的時間和空間的熒光圖像的變化,，還可以觀察細胞某一層面或局部的（Ca2+）熒光圖像和變化,。通過對單細胞的研究發(fā)現，Ca2+不僅在細胞局部區(qū)域間的分布是不均勻的,，而且細胞內各局部區(qū)域的不同深度或層次間也存在不同程度的Ca2+梯差即所謂的空間Ca2梯差,。布魯克多光子顯微鏡成像區(qū)域