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日本單電極膜片鉗研究

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-05-26

光遺傳學(xué)調(diào)控技術(shù)是近幾年正在迅速發(fā)展的一項(xiàng)整合了光學(xué),、基因操作技術(shù),、電生理等多學(xué)科交叉的生物技術(shù)。NatureMethods雜志將此技術(shù)評(píng)為"Methodoftheyear2010"[19];美國(guó)麻省理工學(xué)院科技評(píng)述(MITTechnologyReview,,2010)在其總結(jié)性文章"Theyearinbiomedicine"中指出:光遺傳學(xué)調(diào)控技術(shù)現(xiàn)已經(jīng)迅速成為生命科學(xué),特別是神經(jīng)和心臟研究領(lǐng)域中熱門(mén)的研究方向之一,。目前這一技術(shù)正在被全球幾百家從事心臟學(xué),、神經(jīng)科學(xué)和神經(jīng)工程研究的實(shí)驗(yàn)室使用,幫助科學(xué)家們深入理解大腦的功能,,進(jìn)而為深刻認(rèn)識(shí)神經(jīng),、精神疾病、心血管疾病的發(fā)病機(jī)理并研發(fā)針對(duì)疾病干預(yù)和的新技術(shù),。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*32小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢(xún).膜片鉗通常由兩個(gè)平行的,、彎曲的鉗臂組成,鉗臂的末端有一對(duì)夾持墊,,可以?shī)A住薄片材料,。日本單電極膜片鉗研究

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    離子通道是一種特殊的膜蛋白,它橫跨整個(gè)膜結(jié)構(gòu),,是細(xì)胞內(nèi)部與部外聯(lián)系的橋梁和細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換的孔道,,當(dāng)通道開(kāi)放時(shí)。細(xì)胞內(nèi)外的一些無(wú)機(jī)離子如Na,,kCa等帶電離子可經(jīng)通道順濃度梯度或電位梯度進(jìn)行跨膜擴(kuò)散,,從而形成這些帶電離子在膜內(nèi)外的不同分布態(tài)勢(shì),這種態(tài)勢(shì)和在不同狀態(tài)下的動(dòng)態(tài)變化是可興奮細(xì)胞靜息電位和動(dòng)作電的基礎(chǔ),。這些無(wú)機(jī)離子通過(guò)離子通道的進(jìn)圍所產(chǎn)生的電活動(dòng)是生命活動(dòng)的基礎(chǔ),,只有在此基礎(chǔ)上才可能有腺體分泌、肌肉收縮,、基因表達(dá),、新陳代謝等生命活動(dòng)。離子通道結(jié)構(gòu)和功能障礙決定了許多疾病的發(fā)生和發(fā)展,。因此,,了解離子通道的結(jié)構(gòu)、功能以及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系對(duì)于從分子水平深入探討某些疾病的病理生理機(jī)制、發(fā)現(xiàn)特異藥物或措施等均具有十分重要的理論和實(shí)際意義,。 德國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗哪家好膜片鉗的膜電容檢測(cè)與碳纖電極電化學(xué)檢測(cè)聯(lián)合運(yùn)用的技術(shù),。

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膜片鉗技術(shù)的創(chuàng)立取代了電壓鉗技術(shù),是細(xì)胞電生理研究的一個(gè)飛躍,,使得離子通道的研究,,從宏觀深入到微觀,使昔日的“肉湯生理學(xué)(brothphysiology)”與“閃電生理學(xué)(lightningphysiology)”在分子水平上結(jié)合起來(lái),,使人們對(duì)膜通道的認(rèn)識(shí)耳目一新,。當(dāng)前,生理學(xué),、生物物理學(xué),、生物化學(xué)、分子生物學(xué)和藥理學(xué)等多種學(xué)科正在把膜片鉗技術(shù)和膜通道蛋白重組技術(shù),、同位素示蹤技術(shù)和光譜技術(shù)等非電生理技術(shù)結(jié)合起來(lái),,協(xié)同對(duì)離子通道進(jìn)行較全的研究。不少實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)將基因工程與膜片鉗技術(shù)結(jié)合起來(lái),,把通道蛋白有目的地重組于人工膜中進(jìn)行研究,。設(shè)想將合成的通道蛋白分子接種入機(jī)體以替換有缺陷和異常的通道的功能而達(dá)到的目的。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*53小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢(xún).

電壓鉗技術(shù),,是20世紀(jì)初由Cole發(fā)明,,Hodgkin和Huxley完善,其設(shè)計(jì)的主要目的是為了證明動(dòng)作電位的產(chǎn)生機(jī)制,,即動(dòng)作電位的峰電位是由于膜對(duì)鈉的通透性發(fā)生了一過(guò)性的增大過(guò)程,。但當(dāng)時(shí)沒(méi)有直接測(cè)定膜通透性的方法,于是就用膜對(duì)某種離子的電導(dǎo)來(lái)**該種離子的通透性,,膜電導(dǎo)測(cè)定的依據(jù)是電學(xué)中的歐姆定律,,如膜的Na電導(dǎo)GNa與電化學(xué)驅(qū)動(dòng)力(Em-ENa)和膜電流INa的關(guān)系GNa=INa/(Em-ENa).因此可通過(guò)測(cè)量膜電流,再利用歐姆定律來(lái)計(jì)算膜電導(dǎo),,但是,,利用膜電流來(lái)計(jì)算膜電導(dǎo)時(shí),記錄膜電流期間的膜電位必須保持不變,,否則膜電流的變化就不能**膜電導(dǎo)的變化,。這一條件是利用電壓鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)的。下張幻燈中的右邊兩張圖是Hodgkin和Huxley在半個(gè)世紀(jì)以前利用電壓鉗記錄的搶烏賊的動(dòng)作電位和動(dòng)作電位過(guò)程中的膜電流的變化圖,,他們的實(shí)驗(yàn)***證明參與動(dòng)作電位的離子流由Na,,k,漏(Cl)三種成分組成,。并對(duì)這些離子流進(jìn)行了定量分析。這一技術(shù)對(duì)闡明動(dòng)作電位的本質(zhì)和離子通道的的研究做出了極大的貢獻(xiàn)。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*34小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢(xún).以膜片鉗為鑰匙,,打開(kāi)細(xì)胞離子通道研究的大門(mén),!

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實(shí)驗(yàn)溶液浸溶細(xì)胞溶液和微電極玻璃管內(nèi)的填充液成分對(duì)全細(xì)胞膜片鉗記錄也是很重要的內(nèi)容,這關(guān)系到封接的容易程度,、細(xì)胞存活狀態(tài)及膜電位的狀態(tài)等,。在實(shí)驗(yàn)記錄過(guò)程中,尤其是神經(jīng)生物學(xué)實(shí)驗(yàn),,需要迅速更換細(xì)胞浸溶液濃度以免受體敏感性降低(desensitization)或需要模擬快速突觸反應(yīng)的壽命,。原則上細(xì)胞的浸溶液成分或玻璃管內(nèi)填充液成分應(yīng)該與細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)間質(zhì)的成分相似,實(shí)際研究中,,為了探討某些通道或電位特性,,對(duì)這些實(shí)驗(yàn)溶液的成分或濃度會(huì)作必要調(diào)整,沒(méi)有哪種溶液是理想的,。一些學(xué)者建立了組織切片膜片鉗技術(shù)(Slicepatch),,就能在哺乳動(dòng)物腦片制備上做全細(xì)胞記錄。日本單電極膜片鉗

微電極的制備膜片鉗電極是用外徑為1-2mm的毛細(xì)玻璃管拉制成的,。日本單電極膜片鉗研究

在大多數(shù)膜片鉗實(shí)驗(yàn),,要求所有實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備均具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性,以使微電極與細(xì)胞膜之間的相對(duì)運(yùn)動(dòng)盡可能小,。防震工作臺(tái)放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器,,其他設(shè)備置于臺(tái)外。屏蔽罩由銅絲網(wǎng)制成,,接地以防止周?chē)h(huán)境的雜散電場(chǎng)對(duì)膜片鉗放大器的探頭電路的干擾,。儀器設(shè)備架要靠近工作臺(tái),便于測(cè)量?jī)x器與光學(xué)儀器配接,。倒置顯微鏡是膜片鉗實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的主要光學(xué)部件,,它不僅具有較好的視覺(jué)效果,便于將玻璃電極與細(xì)胞的頂部接觸,,而且是借助移動(dòng)物鏡來(lái)實(shí)現(xiàn)聚焦,,具有較好的機(jī)械穩(wěn)定性。視頻監(jiān)視器主要是用來(lái)監(jiān)視實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的操作,,特別是能將封接參數(shù)(如封接阻抗)與細(xì)胞的形態(tài)對(duì)應(yīng),,以實(shí)現(xiàn)良好的封接。日本單電極膜片鉗研究