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芬蘭膜片鉗離子電流

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-11-23

膜片鉗的基本原理則是利用負(fù)反饋電子線路,,將微電極前列所吸附的一個(gè)至幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜的電位固定在一定水平上,,對(duì)通過通道的微小離子電流作動(dòng)態(tài)或靜態(tài)觀察,從而研究其功能,。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)膜電流固定的關(guān)鍵步驟是在玻璃微電極前列邊緣與細(xì)胞膜之間形成高阻密封,,其阻抗數(shù)值可達(dá)10~100GΩ(此密封電阻是指微電極內(nèi)與細(xì)胞外液之間的電阻)。由于此阻值如此之高,,故基本上可看成絕緣,,其上之電流可看成零,形成高阻密封的力主要有氫健,、范德華力,、鹽鍵等,。此密封不僅電學(xué)上近乎絕緣,,在機(jī)械上也是較牢固的。又由于玻璃微電極前列管徑很小,,其下膜面積只約1μm2,,在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少,一般只有一個(gè)或幾個(gè)通道,,經(jīng)這一個(gè)或幾個(gè)通道流出的離子數(shù)量相對(duì)于整個(gè)細(xì)胞來講很少,,可以忽略,也就是說電極下的離子電流對(duì)整個(gè)細(xì)胞的靜息電位的影響可以忽略,,那么,,只要保持電極內(nèi)電位不變,則電極下的一小片細(xì)胞膜兩側(cè)的電位差就不變,,從而實(shí)現(xiàn)電位固定,。在膜電位改變時(shí),在電場(chǎng)的作用下,,重新分布導(dǎo)致通道的關(guān)閉,,同時(shí)有電荷移動(dòng),稱為門控電流,。芬蘭膜片鉗離子電流

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膜片鉗的應(yīng)用范圍:1.單離子通道(如鈉,、鉀)的功能研究,;2.心肌細(xì)胞離子通道研究(尤其與藥物作用相關(guān)的);3.常規(guī)與病理的離子通道作用機(jī)制研究,;4.單細(xì)胞的形態(tài)與功能關(guān)系的研究,;5.心血管藥理學(xué)的研究;6.腦片膜片鉗(證實(shí)了腦組織在體外也能存活并保持很好的活性狀態(tài),,能使對(duì)腦細(xì)胞的研究更接近生理狀態(tài)下的情況,,可檢驗(yàn)不同腦區(qū)間的神經(jīng)通路與功能鏈接);7.神經(jīng)環(huán)路的研究(光遺傳或化學(xué)遺傳病毒載體表達(dá)的驗(yàn)證),;8.神經(jīng)突觸可塑性的研究,。芬蘭全自動(dòng)膜片鉗多少錢在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時(shí),記錄到ACh啟動(dòng)的單通道離子電流,,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù),。

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20世紀(jì)初由Cole發(fā)明,Hodgkin和Huxleyw完善,,目的是為了證明動(dòng)作電位的峰電位是由于膜對(duì)鈉的通透性發(fā)生了一過性的增大過程,。但當(dāng)時(shí)沒有直接測(cè)定膜通透性的辦法,于是就用膜對(duì)某種離子的電導(dǎo)來**該種離子的通透性,。為了弄清膜電導(dǎo)變化的機(jī)制和離子通道的存在,,也為了克服電壓鉗的缺點(diǎn)Erwin和Bert在電壓鉗的基礎(chǔ)上發(fā)明了膜片鉗,并利用該技術(shù)***在蛙肌膜上記錄到PA級(jí)的乙酰膽堿激動(dòng)的單通道電流,,***證明了離子通道的存在,。并證明在完整細(xì)胞膜上記錄到膜電流是許多單通道電流總和的結(jié)果。這一技術(shù)被譽(yù)為與分子克隆技術(shù)并駕齊驅(qū)的劃時(shí)代的偉大發(fā)明,。二人因此獲得諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng),。

1976年德國(guó)馬普生物物理化學(xué)研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時(shí),記錄到ACh的單通道離子電流,,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù),。1980年Sigworth等在記錄電極內(nèi)施加5-50cmH2O的負(fù)壓吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),,明顯降低了記錄時(shí)的噪聲實(shí)現(xiàn)了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破,。1981年Hamill和Neher等對(duì)該技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn),引進(jìn)了膜片游離技術(shù)和全細(xì)胞記錄技術(shù),,從而使該技術(shù)更趨完善,,具有1pA的電流靈敏度、1μm的空間分辨率和10μs的時(shí)間分辨率,。1983年10月,,《Single-ChannelRecording》一書問世,奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑,。Sakmann和Neher也因其杰出的工作和突出貢獻(xiàn),,榮獲1991年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng),。脂質(zhì)層電導(dǎo)很低,由于雙分子層的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),,形成了細(xì)胞的膜電容,,通道蛋白開閉狀況主要決定了膜電導(dǎo)的數(shù)值。

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膜片鉗技術(shù)原理:膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個(gè)離子通道,、面積為幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜通過負(fù)壓吸引封接起來(見右圖),,由于電極前列與細(xì)胞膜的高阻封接,在電極前列籠罩下的那片膜事實(shí)上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離,,因此,,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管,用一個(gè)極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測(cè)量此電流強(qiáng)度,,就單一離子通道電流膜片鉗技術(shù)的建立,,對(duì)生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的(或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù),。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*30小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.膜片鉗技術(shù),,為您揭示細(xì)胞生命活動(dòng)的細(xì)微變化!芬蘭膜片鉗離子電流

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膜片鉗技術(shù)原理:膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個(gè)離子通道,、面積為幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜通過負(fù)壓吸引封接起來(見右圖),由于電極前列與細(xì)胞膜的高阻封接,,在電極前列籠罩下的那片膜事實(shí)上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離,,因此,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管,,用一個(gè)極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測(cè)量此電流強(qiáng)度,,就單一離子通道電流膜片鉗技術(shù)的建立,對(duì)生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革,。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的(或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。芬蘭膜片鉗離子電流