目前有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法，且都可以用于體內(nèi)和體外研究,。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個神經(jīng)元中,。此方法方便實驗者控制單個神經(jīng)元內(nèi)的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負載神經(jīng)元,，觀察對象為一群神經(jīng)元,。盡管此方法可能導(dǎo)致一些膠質(zhì)細胞也被指示劑所標(biāo)記，但提高了整體神經(jīng)元的標(biāo)記百分比,，使研究者得以觀察到一群神經(jīng)元內(nèi)動作電位相關(guān)性的活動,。第三種也較為常用，通過病毒轉(zhuǎn)染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑,。（A）單細胞注射法,；（B）networkloading法；（C）通過病毒轉(zhuǎn)染使其基因編碼鈣離子指示劑（expressionofgeneticallyencodedcalciumindicators,GECI）神經(jīng)方面科學(xué)迫切需要一種能夠兼顧全局和微觀的新型鈣成像技術(shù),。細胞鈣離子鈣成像nVoke

與傳統(tǒng)的單光子寬視野熒光顯微鏡相比,，多光子顯微鏡（MPM）具有光學(xué)切片和深層成像等功能，這兩個優(yōu)勢極大地促進了研究者們對于完整在體大腦深處神經(jīng)的了解與認識,。2019年,，JeromeLecoq等人從大腦深處的神經(jīng)元成像、大量神經(jīng)元成像,、高速神經(jīng)元成像這三個方面論述了相關(guān)的MPM技術(shù),。想要將神經(jīng)元活動與復(fù)雜行為聯(lián)系起來，通常需要對大腦皮質(zhì)深層的神經(jīng)元進行成像,，這就要求MPM具有深層成像的能力,。激發(fā)和發(fā)射光會被生物組織高度散射和吸收是限制MPM成像深度的主要因素，雖然可以通過增加激光強度來解決散射問題,，但這會帶來其他問題,，例如燒壞樣品、離焦和近表面熒光激發(fā),。增加MPM成像深度比較好的方法是用更長的波長作為激發(fā)光,。美國熒光顯微鈣成像參考價鈣成像技術(shù)（calcium imaging）是指利用鈣離子指示劑監(jiān)測組織內(nèi)鈣離子濃度的方法。

細胞內(nèi)鈣離子作為重要的信號分子其作用具有時間性和空間性,。當(dāng)di1個細胞興奮時,，產(chǎn)生了一個電沖動，此時,，細胞外的鈣離子流入該細胞內(nèi),，促使該細胞分泌神經(jīng)遞質(zhì),，神經(jīng)遞質(zhì)與相鄰的下一級神經(jīng)細胞膜上的蛋白分子結(jié)合，促使這一級神經(jīng)細胞產(chǎn)生新的電沖動,。以此類推,，神經(jīng)信號便一級一級地傳遞下去，從而構(gòu)成復(fù)雜的信號體系,，終形成學(xué)習(xí),、記憶等大腦的高級功能。在哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)中,，鈣離子同樣扮演著重要的信號分子的角色,。靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細胞內(nèi)鈣離子濃度約為50-100nM，而細胞興奮時鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍,，增加的鈣離子對于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質(zhì)的過程必不可少。眾所周知,，只有游離鈣才具有生物學(xué)活性,，而細胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定，同時也受鈣結(jié)合蛋白的影響,。細胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種,，其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體,、煙堿型膽堿能受體（nAChR）和瞬時受體電位C型通道（TRPC）等,。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來，以反映神經(jīng)元活性,。該方法可以同時觀察多個功能或位置相關(guān)的腦細胞,。

在神經(jīng)系統(tǒng)研究中，我們常使用鈣指示劑表征鈣離子濃度變化,，以反映神經(jīng)元的活動,。常見的鈣成像方法有雙光子熒光成像和單光子熒光成像兩種，其中后者是研究腦神經(jīng)活動的常用方法,。但與雙光子成像相比,，單光子成像更易受到來自神經(jīng)元的高水平串?dāng)_，導(dǎo)致信噪比降低,。不僅如此,，采集活動信號時還易被來自近距離通過的軸突和樹突的信號所污染，造成的非特異性信號,，這些均嚴(yán)重影響對神經(jīng)元活動反應(yīng)的精細成像,。因而，在單光子熒光成像的基礎(chǔ)上,，研究團隊在細胞核中表達遺傳編碼的鈣指示劑,，從而消除神經(jīng)纖維信號。但與經(jīng)典的胞質(zhì)鈣成像相比，鈣進入細胞核的要求降低了這種成像的時間精度,。鈣信號在神經(jīng)元功能調(diào)控及信息傳遞方面發(fā)揮著重要作用,。

研究顯示NL189BLA神經(jīng)元通過投射到CEA來控制探索行為中動物的運動速度和瞬時停滯。隨著進一步的探索,，該神經(jīng)元群體的活性以經(jīng)驗依賴性的方式增加,，而NL189BLA神經(jīng)元的暫時性功能喪失會導(dǎo)致瞬間停滯的yizhi，而且這些行為停滯與焦慮和恐懼無關(guān),。動物在這些停滯點開始和終止探索性旅程并在停滯后會改變頭部朝向和運動軌跡方向,，因此在熟悉的位置進行短暫停滯可能是替代性嘗試錯誤行為的決策。這些結(jié)果揭示杏仁核作為新穎性/熟悉性檢測器以及行為效應(yīng)器環(huán)路的共同作用,，其具有基于探索行為期間的空間經(jīng)驗來驅(qū)動或yizhi自發(fā)運動的能力,，這對于動物在自然界中安全有效的探索未知環(huán)境是十分必要的。鈣成像數(shù)據(jù)采集盒擁有 2TB 存儲空間,，可選擇以太網(wǎng)或 Wi? 方式連接電腦,。重慶超微顯微鈣成像什么價格

鈣成像系統(tǒng)在自由行為動物上對鈣離子動態(tài)進行單細胞分辨率級別的持久成像。細胞鈣離子鈣成像nVoke

鈣離子在很多生理活動中都發(fā)揮著重要作用,，除了在肌肉細胞收縮中扮演著重要角色,，鈣離子也是神經(jīng)元活動的重要“風(fēng)向標(biāo)”之一：當(dāng)神經(jīng)元膜電位發(fā)生去極化，產(chǎn)生的動作電位傳導(dǎo)到神經(jīng)元軸突末梢時,，細胞膜上的電壓門控鈣離子通道打開,，大量鈣離子內(nèi)流，包含神經(jīng)遞質(zhì)的囊泡由突觸前膜釋放至后膜,，下游神經(jīng)元就得以接受到上游的信號,。因此，鈣離子成像可以追蹤神經(jīng)元動作電位,，從而幫助我們了解神經(jīng)元集群的活動,，可以用于感知覺，學(xué)習(xí)記憶,，社會性行為等各種各樣的研究中細胞鈣離子鈣成像nVoke