雙光子技術(shù)在醫(yī)學診斷方面有著巨大的應(yīng)用潛力。這方面沒有標準和體系,，需要系統(tǒng)的醫(yī)學研究和龐大的醫(yī)學數(shù)據(jù)支撐,。通過基于多光子成像技術(shù)研究細胞結(jié)構(gòu)、生化成分,、微環(huán)境,、組織形態(tài)、代謝功能的影響信息,，可以發(fā)現(xiàn)與細胞學,、分子生物學、組織病理學,、疾病的診斷和特征的關(guān)系,。共同探索生理病理基礎(chǔ)和分子細胞生物學機制，篩選皮膚病,、自身免疫性疾病等疑難疾病的識別,、診斷和鑒別診斷依據(jù)，建立全新完整的多光子細胞診斷數(shù)據(jù)庫,，明確不同疾病的多光子臨床檢測設(shè)備產(chǎn)品標準,。在討論環(huán)節(jié)，來自病理科,、呼吸中心,、心內(nèi)科,、神經(jīng)內(nèi)科、皮膚科,、研究所的多位醫(yī)生和科研人員結(jié)合各自的工作領(lǐng)域,，與王愛民副教授進行了熱烈的討論。其中,，毛發(fā)中心楊頂權(quán)主任擬再次邀請王愛民副教授進行學術(shù)交流,。通過此次學術(shù)交流，病理學系和研究所分別與王愛民副教授課題組達成了初步合作意向,。由于雙光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源,，適用于長時間的研究。國內(nèi)investigator雙光子顯微鏡最大分辨率

和很多偉大的科學發(fā)明一樣,，雙光子顯微鏡的出現(xiàn)也有一點偶然,，但正是那瞬間的靈感為生物科學尤其是神經(jīng)科學帶來了一種**性的成像技術(shù)：雙光子激發(fā)熒光顯微鏡。1990年初,，當WinfriedDenk剛從康奈爾大學博士畢業(yè)準備前往瑞士讀博后時,，他看了一本關(guān)于激光掃描顯微鏡的書，從中了解到非線性光學效應(yīng)——強光和物質(zhì)的相互作用,。當時,，Denk有同事研究生物樣品中的鈣離子但苦于沒有強大的紫外激光器和光學元件，于是他就想到如果使用雙光子吸收就能夠繞開紫外,，換言之,，與其通過一個紫外光子激發(fā)標記的鈣離子，通過兩個雙倍波長的可見光光子也能激發(fā)相同的熒光,。有了想法后馬上實驗,。借了一套染料飛秒激光器，Denk聯(lián)合他的導師WattWebb及其博士生JamesStrickler只用六個小時就完成了實驗搭建,，采集數(shù)據(jù)則用了兩到三天,，于是一篇里程碑式的文章就此誕生了。進口雙光子顯微鏡分辨率雙光子顯微鏡能夠進行指標成像,；

在傳統(tǒng)寬場顯微鏡中,，來自標本不同縱深的光線都可投射到同一焦平面（感光元件）上，所以其成像是整個樣品的重疊像,，沒有縱向分辨能力,。單光子激光共聚焦顯微鏡用針空有效濾除了雜散光，分辨率有了本質(zhì)上的提高,，擁有了對樣品的特定焦平面精細成像的能力,，可以進行三維成像、動態(tài)成像等。然而,，針空在濾除雜散光的同時也將大部分來自焦平面的熒光濾除了,，只有很弱的熒光到達檢測器。若要提高信號強度,，需要加大激發(fā)光功率,，這又會導致對活細胞的光毒性和熒光分子的光漂白增加。雙光子顯微鏡蕞大的優(yōu)勢來源于其雙光子光源的非線性光學效應(yīng),，與單光子共聚焦顯微鏡蕞大的不同在于無須使用針空限制光學散射,，其具體優(yōu)勢如下所述。

從雙光子的原理和特點我們就可以明顯的得出雙光子的優(yōu)點：☆光損傷?。河捎陔p光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源,，這一波段的光對細胞和組織的光損傷小，適用于長時間的研究,；☆穿透能力強：相對于紫外光，可見光和近紅外光都具有更強的穿透能力,，因而受生物組織散射的影響更小,，解決對生物組織中深層物質(zhì)的層析成像研究問題；☆高分辨率：由于雙光子吸收截面很小,，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光,，雙光子吸收局限于焦點處的體積約為波長3次方的范圍內(nèi)；☆漂白區(qū)域?。河捎诩ぐl(fā)只存在于交點處,，所以焦點以外的區(qū)域都不會發(fā)生光漂白現(xiàn)象；☆熒光收集率高：與共聚焦成像相比,，雙光子成像不需要光學濾波器（共焦）,，這樣就提高了對熒光的收集率，而收集率的提高直接導致圖像對比度的提高,；☆圖像對比度高：由于熒光波長小于入射波長,，因而瑞利散射產(chǎn)生的背景噪聲只有單光子激發(fā)時的1/16，降低了散射的干擾,；☆光子躍遷具有很強的選擇激發(fā)性,，所以可以對生物組織中一些特殊物質(zhì)進行成像的研究；雙光子顯微鏡不需要共聚焦細孔,，提高了熒光檢測效率,。

而配合了雙光子激發(fā)技術(shù)，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效,。那么,，什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢？在高光子密度的情況下，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級,，經(jīng)過一個很短的時間后,，電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子（P=h/λ）。利用這個原理,，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù),。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光，通過物鏡匯聚,，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，而物鏡焦點處的光子密度是比較高的，所以只有在焦點處才能發(fā)生雙光子激發(fā),，產(chǎn)生熒光,，該點產(chǎn)生的熒光再穿過物鏡，被光探頭接收,，從而達到逐點掃描的效果,。雙光子顯微鏡的探測器,該怎么選用?國外ultimainvestigator雙光子顯微鏡的成像視野

雙光子顯微鏡將得到更大的發(fā)展與更廣的應(yīng)用。國內(nèi)investigator雙光子顯微鏡最大分辨率

有了雙光子激發(fā)技術(shù),，激光共聚掃描顯微鏡可以發(fā)揮更好的作用,。那么，什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢,？在光子密度較高的情況下,，熒光分子可以同時吸收兩個波長較長的光子，使電子躍遷到更高的能級,。短時間后,，電子跳回到較低的能級，發(fā)出波長為長波長一半的光子(P=h/λ),。利用這個原理,，雙光子激發(fā)技術(shù)誕生了。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光通過物鏡會聚,。由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，物鏡焦點處的光子密度比較高，所以雙光子激發(fā)只能發(fā)生在焦點處產(chǎn)生熒光,，該點產(chǎn)生的熒光穿過物鏡,，被光學探頭接收，從而達到逐點掃描的效果,。國內(nèi)investigator雙光子顯微鏡最大分辨率