在生物成像中，我司多光子顯微鏡具有清晰,，快速，深層,，活這四個方面,。結(jié)合了多光子上轉(zhuǎn)化材料以及時間編碼的結(jié)構(gòu)光超分辨技術(shù)，實現(xiàn)了快速（50MHz的掃描速度）,，超分辨（超衍射極限）成像,。作為一種新的高速，超高分辨率的成像系統(tǒng),，MUTE-SIM可以幫助我們對快速運動的生物圖像進(jìn)行分辨率高的成像,。盡管關(guān)于深度成像的應(yīng)用我們沒有進(jìn)一步展示，但是結(jié)合1560nm近紅外光相對于可見光更佳的穿透性,，我們相信該技術(shù)將有利于對生物組織進(jìn)行高速,，超分辨，高深度地成像,，有助于生物影像學(xué)的發(fā)展,。滔博生物TOP-Bright是一家集研發(fā)，生產(chǎn),，銷售于一體的專注于神經(jīng)科學(xué)產(chǎn)品及致力于向高校,、科研機構(gòu)等領(lǐng)域提供實驗室一體化方案的高科技企業(yè)。業(yè)務(wù)服務(wù)范圍已遍布至全國各地幾百家實驗室,。目前公司主營產(chǎn)品是享譽全球的國際品牌和產(chǎn)品,這些儀器設(shè)備都是科學(xué)研究所必備且不可替代的基礎(chǔ)儀器,。多光子激光掃描顯微鏡更能解決生物組織中深層物質(zhì)的層析成像問題, 擴大了應(yīng)用范圍。美國布魯克多光子顯微鏡成像分辨率

當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時,，隨著刺激時間的增加,，即使繼續(xù)刺激，Ca2+熒光信號也不會繼續(xù)增強，反而會減弱,，直至恢復(fù)到無刺激時的水平,。對于細(xì)胞受精過程中Ca2+熒光信號的變化，發(fā)現(xiàn)粘附過程中Ca2+熒光信號沒有變化,，但當(dāng)配子融合時,，Ca2+熒光信號強度出現(xiàn)一個不穩(wěn)定的峰值，持續(xù)數(shù)分鐘,。這些現(xiàn)象對于研究受精發(fā)育的早期信號以及Ca2+在卵子和受精卵發(fā)育中的作用具有重要意義,。在其他生理過程中，如細(xì)胞分裂和胞吐,，Ca2+熒光信號的強度也會發(fā)生很大的變化,。在體多光子顯微鏡成像深度多光子顯微鏡在基礎(chǔ)科學(xué)和臨床診斷領(lǐng)域的應(yīng)用范圍正在持續(xù)增長。

雙光子顯微鏡工作原理是將超快的紅外激光脈沖傳輸?shù)綐悠分?，在樣品中與組織或熒光標(biāo)記相互作用,，這些組織或熒光標(biāo)記發(fā)出用于創(chuàng)建圖像的信號。雙光子顯微鏡被多用于生物學(xué)研究,，因為它能夠產(chǎn)生高分辨率的3-D圖像,，深度達(dá)1毫米。然而,，這些優(yōu)點帶來了有限的成像速度,，因為微光條件需要逐點圖像采集和重建的點檢測器。為了加快成像速度,，科學(xué)家之前開發(fā)了一種多焦點激光照明方法,，該方法使用數(shù)字微鏡設(shè)備(DMD)，這是一種通常用于投影儀的低成本光掃描儀,。此前人們認(rèn)為這些DMD不能與超快激光一起工作,。然而現(xiàn)在解決了這個問題，這使得DMD在超快激光應(yīng)用中得以應(yīng)用,，這些應(yīng)用包括光束整形,、脈沖整形、快速掃描和雙光子成像,。DMD在樣品內(nèi)隨機選擇的位置上產(chǎn)生5到30點聚焦激光,。

當(dāng)激光光束焦點的位置在鏡面上，此時被反射的激光在無限空間中成為準(zhǔn)直光束,，并在OBJ2的焦平面上形成了一個激光光斑,。同理，如果橫向掃描光束,，則會形成遠(yuǎn)離傾斜鏡鏡面的焦點,，這又導(dǎo)致返回的光束會聚或發(fā)散,，進(jìn)而OBJ2能在軸向不同位置形成焦點，通過這種方式即能實現(xiàn)連續(xù)的軸向掃描,。對于較小的傾斜角,，聚焦沒有球差。該組在實驗中表征了這種將橫向掃描轉(zhuǎn)換為軸向掃描技術(shù)的光學(xué)性能,，并使用它將光片顯微鏡的成像速度提升了一個數(shù)量級,，從而可以在三個維度上量化快速的囊泡動力學(xué)。該組還演示了使用雙光子光柵掃描顯微鏡以12kHz進(jìn)行共振遠(yuǎn)程聚焦,，該技術(shù)可對大腦組織和斑馬魚心臟動力學(xué)進(jìn)行快速成像,，并具有衍射極限的分辨率。多光子顯微鏡已經(jīng)被生物學(xué)家普遍的運用于實驗中,。

與傳統(tǒng)的單光子寬視野熒光顯微鏡相比,，多光子顯微鏡具有光學(xué)切片和深層成像等功能，這兩個優(yōu)勢極大地促進(jìn)了研究者們對于完整大腦深處神經(jīng)的了解與認(rèn)識,。2019年,，JeromeLecoq等人從大腦深處的神經(jīng)元成像、大量神經(jīng)元成像,、高速神經(jīng)元成像這三個方面論述了相關(guān)的MPM技術(shù),。想要將神經(jīng)元活動與復(fù)雜行為聯(lián)系起來，通常需要對大腦皮質(zhì)深層的神經(jīng)元進(jìn)行成像,，這就要求MPM具有深層成像的能力。激發(fā)和發(fā)射光會被生物組織高度散射和吸收是限制MPM成像深度的主要因素,，雖然可以通過增加激光強度來解決散射問題,，但這會帶來其他問題，例如燒壞樣品,、離焦和近表面熒光激發(fā),。增加MPM成像深度比較好的方法是用更長的波長作為激發(fā)光。多光子顯微鏡技術(shù)是對完整組織進(jìn)行深層熒光成像的優(yōu)先技術(shù),。美國飛秒激光多光子顯微鏡實驗操作

使用雙光子顯微鏡觀察標(biāo)本的時候,，只有在焦平面上才有光漂白和光毒性。美國布魯克多光子顯微鏡成像分辨率

細(xì)胞在受到外界刺激時,，隨著刺激時間的增長,，即使刺激繼續(xù)存在，Ca2+熒光信號不但不會繼續(xù)增強,，反而會減弱,，直至恢復(fù)到未加刺激物時的水平。對于細(xì)胞受精過程中Ca2+熒光信號的變化情況,，研究發(fā)現(xiàn),，配了在粘著過程中,，Ca2+熒光信號未發(fā)生任何變化，而配子之間發(fā)生融合作用時,，Ca2+熒光信號強度卻會出現(xiàn)一個不穩(wěn)定的峰值,，并可持續(xù)幾分鐘。這些現(xiàn)象,，對研究受精發(fā)育的早期信號及Ca2+在卵細(xì)胞和受精卵的發(fā)育過程中的作用具有重要的意義,。在其它一些生理過程如細(xì)胞分裂、胞吐作用等,，Ca2+熒光信號強度也會發(fā)生很強的變化,。美國布魯克多光子顯微鏡成像分辨率