TOPTICAFemtoFiberultra920超快光纖激光器是一種易于操作和免維護(hù)的激光系統(tǒng)其輸出波長(zhǎng)為920nm,，非常適合常規(guī)熒光基團(tuán)(如GFP、eGFP,、曙紅,、GCaMP、CFP,、鈣黃綠素或金星)的雙光子激發(fā),。它可以為熒光基團(tuán)提供相對(duì)較高的峰值功率，常用于神經(jīng)科學(xué)和其他與激光相關(guān)的光子學(xué),。此外,，其獨(dú)特的設(shè)計(jì)(簡(jiǎn)單和經(jīng)濟(jì)的光源)具有創(chuàng)新雙光子熒光顯微鏡發(fā)展的潛力。在雙光子顯微鏡中,，峰值功率就是亮度,！如果你想獲得更好的圖像亮度，那么你需要短脈沖,，高功率,，更重要的是，干凈的時(shí)間脈沖形狀,。FemtoFiberultra920具有足夠高的輸出功率,、短脈沖,、獨(dú)特的Clean-Pulse技術(shù)和相對(duì)較高的峰值功率,，這使得在雙光子顯微鏡中實(shí)現(xiàn)****亮度而無需對(duì)樣品進(jìn)行不必要的加熱成為可能。FemtoFiberultra920全包式,、完全集成的色散補(bǔ)償(可確保樣品處的短脈沖),、內(nèi)置電源控制、直觀的操作及其堅(jiān)固緊湊的設(shè)計(jì)使系統(tǒng)具有非常友好的用戶體驗(yàn)，是非線性顯微鏡應(yīng)用的良好解決方案,。例如,，熒光蛋白的雙光子激發(fā)和基于SHG的對(duì)比機(jī)制雙光子顯微鏡在各領(lǐng)域研究中已有許多成功實(shí)例。國外激光雙光子顯微鏡成像視野一般是多少

從雙光子的原理和特點(diǎn),，我們可以清楚地得出雙光子的優(yōu)點(diǎn):☆光損傷小:由于雙光子顯微鏡采用可見光或近紅外光作為激發(fā)光源,，因此該波段的光對(duì)細(xì)胞和組織的光損傷很小，適合長(zhǎng)期研究,；☆穿透能力強(qiáng):與紫外光相比,，可見光和近紅外光的穿透能力更強(qiáng)，因此受生物組織散射的影響更小,，解決了生物組織深層物質(zhì)的層析成像問題,；☆高分辨率:由于雙光子吸收的截面很小，只能在焦平面很小的區(qū)域激發(fā)熒光,，雙光子吸收被限制在焦點(diǎn)處體積約為波長(zhǎng)三次方的范圍內(nèi),；☆漂白區(qū)域小:由于激發(fā)只存在于交點(diǎn)處，焦點(diǎn)外的區(qū)域不會(huì)發(fā)生光漂白,；☆熒光收集率高:與共焦成像相比,，雙光子成像不需要濾光片(共焦)，提高了熒光收集率,，直接導(dǎo)致圖像對(duì)比度的提高,；☆圖像對(duì)比度高:由于熒光波長(zhǎng)小于入射波長(zhǎng)，瑞利散射產(chǎn)生的背景噪聲*為單光子激發(fā)產(chǎn)生的1/16,，減少了散射的干擾,；光子躍遷具有很強(qiáng)的選擇性激發(fā)，因此可以用來對(duì)生物組織中的一些特殊物質(zhì)進(jìn)行成像,；美國激光雙光子顯微鏡作用雙光子顯微鏡中,，同樣每個(gè)時(shí)刻只有焦平面上一個(gè)點(diǎn)的信號(hào)被探測(cè)，并且連焦平面外的熒光信號(hào)也不會(huì)有,。

從雙光子到三光子：科學(xué)家正在從雙光子轉(zhuǎn)向三光子顯微鏡,。1996年，ChrisXu在康奈爾大學(xué)(Denk同導(dǎo)師實(shí)驗(yàn)室)讀博期間發(fā)明了三光子顯微鏡,，如果雙光子吸收可行,，那么三光子看起來也是自然的發(fā)展方向。三光子成像使用更長(zhǎng)的波長(zhǎng),，大約在1.3和1.7微米,，其成像深度也比雙光子更深，目前記錄約為2.2毫米,，人類大腦皮層厚約4毫米,。相比雙光子顯微鏡,，三光子還要求以較低重頻使用更強(qiáng)和更短的激光脈沖，而傳統(tǒng)的鈦寶石激光器難以達(dá)到這些要求,，但是對(duì)于摻鐿光纖飛秒光參量放大器則非常容易,，比如我們的Y-Fi光參量放大器(OPA)。

配合雙光子激發(fā)技術(shù),，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效,。那么，什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢,？在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時(shí)吸收2個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光子使電子躍遷到較高能級(jí)，經(jīng)過一個(gè)很短的時(shí)間后,，電子再躍遷回低能級(jí)同時(shí)放出一個(gè)波長(zhǎng)為長(zhǎng)波長(zhǎng)一半的光子（P=h/λ）,。利用這個(gè)原理，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù),。雙光子顯微鏡使用長(zhǎng)波長(zhǎng)脈沖激光,，通過物鏡匯聚，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，而物鏡焦點(diǎn)處的光子密度是比較高的,，所以只有在焦點(diǎn)處才能發(fā)生雙光子激發(fā)，產(chǎn)生熒光,，該點(diǎn)產(chǎn)生的熒光再次穿過物鏡,，被光探頭接收，從而達(dá)到逐點(diǎn)掃描的效果,。由于其非侵入性和高分辨率的特點(diǎn),，雙光子顯微鏡成為了研究神經(jīng)科學(xué)、ai癥研究,、免疫學(xué)等領(lǐng)域的重要工具,。

WinfriedDenk較初使用的光源是染料飛秒激光器(100fs脈寬、630nm可見光波長(zhǎng)),。雖然染料激光器對(duì)于實(shí)驗(yàn)室演示尚可,，但是使用很不方便所以遠(yuǎn)未實(shí)現(xiàn)商用。很快雙光子顯微鏡的標(biāo)配光源就變成了飛秒鈦寶石激光器,。除了固態(tài)光源優(yōu)勢(shì),，鈦寶石激光器還具有較寬的近紅外波長(zhǎng)調(diào)諧范圍，而近紅外相比可見光穿透更深,，對(duì)生物樣品損傷更小,。下圖是Thorlabs的雙光子和三光子顯微鏡配置，鈦寶石飛秒可調(diào)諧激光器位于平臺(tái)較左邊,?？茖W(xué)家正在從雙光子轉(zhuǎn)向三光子顯微鏡,。1996年,，ChrisXu在康奈爾大學(xué)(Denk同導(dǎo)師實(shí)驗(yàn)室)讀博期間發(fā)明了三光子顯微鏡,，如果雙光子吸收可行，那么三光子看起來也是自然的發(fā)展方向,。三光子成像使用更長(zhǎng)的波長(zhǎng),，大約在1.3和1.7微米，其成像深度也比雙光子更深,，目前記錄約為2.2毫米,，人類大腦皮層厚約4毫米。相比雙光子顯微鏡,，三光子還要求以較低重頻使用更強(qiáng)和更短的激光脈沖,，而傳統(tǒng)的鈦寶石激光器難以達(dá)到這些要求，但是對(duì)于摻鐿光纖飛秒光參量放大器則非常容易,，比如我們的Y-Fi光參量放大器(OPA),。雙光子顯微鏡有哪些應(yīng)用呢？進(jìn)口雙光子顯微鏡商家

雙光子顯微鏡在組織透明化成像中應(yīng)用,；國外激光雙光子顯微鏡成像視野一般是多少

通過對(duì)顯微光學(xué)系統(tǒng)的重新設(shè)計(jì),，將FHIRM-TPM2.0的成像視場(chǎng)擴(kuò)展至420×420平方微米，顯微物鏡的工作距離擴(kuò)展至1mm,，實(shí)現(xiàn)無創(chuàng)成像,。嵌入可拆卸的快速軸向掃描模塊，實(shí)現(xiàn)深度180微米的三維體成像和多平面快速切換的實(shí)時(shí)成像,。該模塊由一個(gè)快速電動(dòng)變焦鏡頭和一對(duì)中繼鏡頭組成,，在不同深度成像時(shí)保持放大率恒定。其中,，變焦模塊重1.8克,，科研人員可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求自由拆卸。此外,，新型微型成像探頭可以瞬間插拔,，極大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，避免了長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)對(duì)動(dòng)物的干擾,。反復(fù)裝卸探針追蹤同批神經(jīng)元時(shí),，視場(chǎng)旋轉(zhuǎn)角度小于0.07弧度，邊界偏差小于35微米,。國外激光雙光子顯微鏡成像視野一般是多少