配合了雙光子激發(fā)技術(shù)，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效,。那么什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢,？在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時(shí)吸收2個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光子使電子躍遷到較高能級(jí),，經(jīng)過一個(gè)很短的時(shí)間后，電子再躍遷回低能級(jí)同時(shí)放出一個(gè)波長(zhǎng)為長(zhǎng)波長(zhǎng)一半的光子（P=h/λ）,。利用這個(gè)原理,，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù)。雙光子顯微鏡使用長(zhǎng)波長(zhǎng)脈沖激光,，通過物鏡匯聚,，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，而物鏡焦點(diǎn)處的光子密度是比較高的,，所以只有在焦點(diǎn)處才能發(fā)生雙光子激發(fā),，產(chǎn)生熒光，該點(diǎn)產(chǎn)生的熒光再穿過物鏡,，被光探頭接收,，從而達(dá)到逐點(diǎn)掃描的效果。雙光子顯微鏡除了可以進(jìn)行厚的組織樣品拍攝以外呢,，可以在小鼠的的任何部位進(jìn)行成像,。國(guó)內(nèi)investigator雙光子顯微鏡成像原理是什么

臨研所、病理科和科研處邀請(qǐng)北京大學(xué)王愛民副教授在2020年12月22日做了題目為“新一代微型雙光子顯微成像系統(tǒng)介紹及其在臨床醫(yī)療診斷”的學(xué)術(shù)報(bào)告,。學(xué)術(shù)報(bào)告由臨研所醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究平臺(tái)潘琳老師主持,。王愛民，北京大學(xué)信息科學(xué)技術(shù)學(xué)院副教授,，畢業(yè)于北京大學(xué)物理系,，獲學(xué)士、碩士學(xué)位,，后于英國(guó)巴斯大學(xué)物理系獲博士學(xué)位,。該研究組研發(fā)的微型雙光子顯微鏡，第1次在國(guó)際上獲得了小鼠大腦神經(jīng)元和神經(jīng)突觸清晰穩(wěn)定的動(dòng)態(tài)信號(hào),，該成果獲得了2017年度“中國(guó)光學(xué)進(jìn)展”和“中國(guó)科學(xué)進(jìn)展”,，并被NatureMethods評(píng)為2018年度“年度方法--無限制行為動(dòng)物成像”。目前,，該研究組正在研究新一代雙光子顯微成像技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用,，為未來即時(shí)病理、離體組織檢測(cè),、術(shù)中診斷等提供新的影像手段和分析方法,。進(jìn)口雙光子顯微鏡光刺激雙光子顯微鏡在組織透明化成像中應(yīng)用；

TOPTICAFemtoFiberultra920超快光纖激光器是一種易于操作且無需維護(hù)的激光系統(tǒng),。其輸出波長(zhǎng)為920nm,，非常適合常規(guī)熒光基團(tuán)（如GFP，eGFP,，Eosin,，GCaMP，CFP,，Calcein或者Venus）的雙光子激發(fā),。能給熒光基團(tuán)提供比較高的峰值功率，常用于神經(jīng)科學(xué)和其他與激光有關(guān)的生物光子學(xué)學(xué)科,。而且其獨(dú)特設(shè)計(jì)（制造簡(jiǎn)單且經(jīng)濟(jì)高效的光源）對(duì)雙光子熒光顯微鏡發(fā)展的革新具有潛在的可能,。在雙光子顯微鏡中，峰值功率就是亮度,！如果您希望獲得比較好的圖像亮度,，那么你就需要短脈沖，高功率,，較重要的是需要干凈的時(shí)間脈沖形狀,。FemtoFiberultra920具有足夠高的輸出功率，較短的脈沖和獨(dú)特的Clean-Pulse技術(shù),，以及具有相對(duì)比較高的峰值功率,，使得其在雙光子顯微鏡中可以實(shí)現(xiàn)****的亮度，而不會(huì)對(duì)樣品造成不必要的加熱,。FemtoFiberultra920交鑰匙,，完全集成的色散補(bǔ)償（可確保樣品處的脈沖較短），內(nèi)置的功率控制,，操作直觀以及其堅(jiān)固而緊湊的設(shè)計(jì),，使該系統(tǒng)具有極為友好的用戶體驗(yàn)，是非線性顯微鏡應(yīng)用的較好解決方案,。例如熒光蛋白的雙光子激發(fā)和基于SHG的對(duì)比機(jī)制,。

雙光子技術(shù)在醫(yī)學(xué)診斷方面有著巨大的應(yīng)用潛力。這方面沒有標(biāo)準(zhǔn)和體系,，需要系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)研究和龐大的醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)支撐,。通過基于多光子成像技術(shù)研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、生化成分,、微環(huán)境,、組織形態(tài)、代謝功能的影響信息,，可以發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞學(xué),、分子生物學(xué)、組織病理學(xué),、疾病的診斷和特征的關(guān)系,。共同探索生理病理基礎(chǔ)和分子細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制，篩選皮膚病,、自身免疫性疾病等疑難疾病的識(shí)別,、診斷和鑒別診斷依據(jù),，建立全新完整的多光子細(xì)胞診斷數(shù)據(jù)庫，明確不同疾病的多光子臨床檢測(cè)設(shè)備產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn),。在討論環(huán)節(jié),，來自病理科、呼吸中心,、心內(nèi)科,、神經(jīng)內(nèi)科、皮膚科,、研究所的多位醫(yī)生和科研人員結(jié)合各自的工作領(lǐng)域,，與王愛民副教授進(jìn)行了熱烈的討論。其中,，毛發(fā)中心楊頂權(quán)主任擬再次邀請(qǐng)王愛民副教授進(jìn)行學(xué)術(shù)交流,。通過此次學(xué)術(shù)交流，病理學(xué)系和研究所分別與王愛民副教授課題組達(dá)成了初步合作意向,。雙光子顯微鏡的基本原理是：在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時(shí)吸收 2 個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光子。

隨著技術(shù)的發(fā)展,，雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化,，結(jié)合它的特點(diǎn)，大致可以分成深和活兩個(gè)方面的提升,。要想讓激發(fā)激光進(jìn)入更深的層面,，大致可從兩個(gè)方面入手，裝置優(yōu)化與標(biāo)本改造,。關(guān)于裝置優(yōu)化,，我們可以把激光束變得更細(xì)，使能量更加集中,，就能讓激光穿透更深,。關(guān)于標(biāo)本，其中影響光傳播的主要是物質(zhì)吸收和散射,，解決這個(gè)問題,，我們需要對(duì)樣本進(jìn)行透明化處理。一種方法是運(yùn)用某種物質(zhì)將標(biāo)本浸泡,，使其中的物質(zhì)（主要是脂質(zhì)）被破壞或溶解,。另一種方法是運(yùn)用電泳將脂質(zhì)電解，讓標(biāo)本的“透明度”提高,。由于其非侵入性和高分辨率的特點(diǎn),，雙光子顯微鏡成為了研究神經(jīng)科學(xué)、ai癥研究、免疫學(xué)等領(lǐng)域的重要工具,。激光雙光子顯微鏡的成像視野

雙光子顯微鏡有哪些應(yīng)用呢,？國(guó)內(nèi)investigator雙光子顯微鏡成像原理是什么

光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡本質(zhì)的區(qū)別在于，光學(xué)顯微鏡：用的是可見光電子顯微鏡：用的是高頻電子射波有什么區(qū)別,，在于一個(gè)基本的原理,，光的衍射。,。。光波是一個(gè)有趣的東西,，其中有一項(xiàng),，如果物體的體積小于光的波長(zhǎng)，光一般可以繞過去,，不發(fā)生明顯變化,。也就是說，有這個(gè)物體和沒這個(gè)物體,，在這種情況下,，光是不會(huì)發(fā)生明顯改變的?？梢姽獾牟ㄩL(zhǎng)（肉眼）：380～780納米,，也就是，如果比380納米還要小的東西,，用光學(xué)顯微鏡,，無論你放大多少倍，也是看不見的,。因?yàn)楣饫@過去了,。。,。光的衍射為了克服這個(gè)問題,，科學(xué)家用波長(zhǎng)更短的光去照射物體，也是就被觀測(cè)物,。比如10納米級(jí)的光,，這樣，就能看到我們用肉眼無論如何都看不見的東西,。這就是電子顯微鏡多說一句,，光速是不變的。光速=頻率×波長(zhǎng),。波長(zhǎng)越短,，頻率越大。。頻率越大,，光波的能量越大,。這就是為什么電子顯微鏡的功率越大，能看到的東西越小,。顏色取決于物體能反射光的波長(zhǎng)的長(zhǎng)短當(dāng)你看到的物體小于較小可見光的波長(zhǎng),，那它就是沒有顏色的。,。,。因?yàn)轭伾侨庋蹖?duì)于可見光頻率在大腦中的投影。,。,。。所以只能把他們統(tǒng)一變?yōu)楹诎?。,。。沒有顏色不是透明的意思,，它們不是肉眼可見顏色的定義中包含的,。國(guó)內(nèi)investigator雙光子顯微鏡成像原理是什么