Cas9核酸酶是一種向?qū)NA(guideRNA,gRNA)引導的核酸內(nèi)切酶,,可催化雙鏈DNA的裂解,。NLS-Cas9-EGFP在Cas9核酸酶的基礎上進行改造,,它在N端包含一個核定位信號(NLS),,在C端包含一個EGFP和一個6X(His)序列,。當Cas9以NLS序列表達時,Cas9RNP復合物在進入細胞后立即定位到細胞核,。不需要體內(nèi)轉(zhuǎn)錄或翻譯,,提高了效率。此外,,與其他系統(tǒng)相比,,EGFP標簽可作為追蹤或分類轉(zhuǎn)染細胞的報告器,通過熒光細胞分選(FACS)富集所需基因組編輯的細胞群。它降低了在基因組編輯應用中與單細胞克隆和基因分型相關的人工和成本,。產(chǎn)品特點如下:無DNA:沒有外部DNA添加;高切割效率:NLS確保Cas9蛋白高效進入細胞核,;低脫靶效應:Cas9核酸酶的瞬時表達提高了切割的特異性,;節(jié)省時間:無需轉(zhuǎn)錄和翻譯;減少勞動力:通過基于EGFP的FACS富集細胞群以進行所需的基因組編輯,。C端His標簽增加了融合蛋白檢測方法的選擇,。可應用于:通過體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA,。通過電穿孔或注射與特定gRNA結(jié)合時的體內(nèi)基因編輯,。通過基于EGFP的FACS富集細胞群以進行所需的基因組編輯。儲存條件-25~-15℃保存,,有效期1年,。IdeS Protease全稱免疫球蛋白G降解酶是由人類致病菌釀膿鏈球菌產(chǎn)生并分泌至胞外的一種半胱氨酸水解酶。Recombinant Human FGF-17
Enterokinase,Recombinant,ExpressedinE.coli大腸桿菌表達重組腸激酶(不帶標簽)注意事項1.本產(chǎn)品所講述的緩沖體系需要自行配置,。2.不建議37℃條件下酶切,,可能會有非特異性酶切出現(xiàn)。3.在>200mM咪唑,,或>200mMNaCl,,或>5%甘油,酶切會受到影響,。如果樣品溶液中含有上述成分的一種或多種,,為獲得理想的酶切結(jié)果,請先將樣品透析到25mMTris-HCl8.0緩沖液中,,然后再進行酶切實驗,;若不方便透析,可將樣品稀釋到咪唑含量在100mM以下,,NaCl濃度在50mM以下,,甘油濃度小于5%以下進行酶切,酶的用量與蛋白比例不變,;若干擾因素很多,,且不便去除,需要適當增加酶量或延長酶切時間,,有助于得到理想的酶切效果,。4.磷酸鹽對Enterokinase有很強的抑制作用,痕量的磷酸鹽都會嚴重影響Enterokinase的活性,,因此在酶切體系內(nèi)不能存在磷酸鹽,。5.本品是具有高酶活力重組腸激酶,切割蛋白使用量少,可不考慮除去,。后續(xù)如需去除重組腸激酶,,可用陰離子交換樹脂(如DEAE-FF)對其進行洗脫。推薦洗脫條件如下:平衡緩沖液:25mMTris-HClpH8.0洗脫緩沖液:25mMTris-HClpH8.0,,含100mMNaCl6.蛋白酶切效果不好,,可適當增加酶量,或適當延長酶切時間,。Recombinant Mouse MADCAM1 Protein,His Tag透明質(zhì)酸的衍生物可以作為基因傳遞的載體,,或用于疫苗佐劑,增強反應,。
3C樣蛋白酶(3CLpro)或主要蛋白酶(Mpro),,正式名稱為C30內(nèi)肽酶或3-胰凝乳蛋白酶樣蛋白酶,[2]是在冠狀病毒中發(fā)現(xiàn)的主要蛋白酶,。它在11個保守位點切割冠狀病毒多蛋白,。它是一種半胱氨酸蛋白酶,是蛋白酶PA家族的成員,。它在其活性位點具有半胱氨酸-組氨酸催化二聯(lián)體并裂解Gln–(Ser/Ala/Gly)肽鍵,。酶委員會將這個家族稱為SARS冠狀病毒主要蛋白酶(Mpro;EC3.4.22.69)。3CL蛋白酶對應于冠狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白5(nsp5),。通用名中的“3C”指的是3C蛋白酶(3Cpro),,是一種在小核糖核酸病毒中發(fā)現(xiàn)的同源蛋白酶。3C樣蛋白酶能夠催化裂解P1位谷氨酰胺和P1'位小氨基酸(絲氨酸,、丙氨酸或甘氨酸)之間的肽鍵,。例如,SARS冠狀病毒3CLpro可以自我切割以下肽:[3][4][5]TSAVLQ-SGFRK-NH2和SGVTFQ-GKFKK是對應于SARS3C樣蛋白酶的兩個自切割位點的兩個肽該蛋白酶在冠狀病毒復制酶多蛋白(P0C6U8)的加工過程中很重要,。它是冠狀病毒中的主要蛋白酶,,對應于非結(jié)構(gòu)蛋白5(nsp5)。[6]它在11個保守位點切割冠狀病毒多蛋白,。3CL蛋白酶在其活性位點具有半胱氨酸-組氨酸催化二元組,。[4]半胱氨酸的硫作為親核試劑,組氨酸的咪唑環(huán)作為一般堿基,。
糖苷酶F(PNGaseF)酶活定義(UnitDefinition)1個酶活力單位指在10μL的反應體系中,,37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。儲存條件-25~-15℃保存,,有效期1年,。使用方法1、變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化:1)在水中加入1μLBuffer1和目標糖蛋白(1-20μg),,至終體積10μL,;2)100℃溫度下煮沸10min使其變性,,冰上冷卻,離心10秒,;加入2μL的Buffer2,、2μL的10%NP-40、6μL去離子水,,總反應體積20μL,;加入1-2μL的PNGase,輕輕混勻,。在37℃孵育1-3h。2,、非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化:1)在水中加入2μL的Buffer2和目標糖蛋白(1-20μg)至體積為20μL,。2)加入2~5μL的PNGaseF,輕輕混勻。3)37°C孵育4-24h,。注意:在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,,在非變性條件下可能需要增加PNGaseF的量和延長孵育時間。注意事項1.PNGaseF建議搭配我司提供的配套緩沖液使用,,按我司說明書建議的操作量配套緩沖液足夠,。如您由于使用體系造成配套緩沖液不足,可咨詢當?shù)劁N售進行購買FGF-18與FGF R2C,,F(xiàn)GF R3C以及高爾基蛋白GLG1結(jié)合,,并誘導星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞。
RecombinantBiotinylatedHumanENPP-3Protein,His-AviTag性能參數(shù)分子別名(Synonyms)NPP3;E-NPP3;PD-Ibeta表達區(qū)間及表達系統(tǒng)(Source)BiotinylatedHumanENPP-3ProteinisexpressedfromHEK293withHistagandAvitagattheN-Terminus.ItcontainsLeu48-Ile875.[Accession|O14638]分子量大?。∕olecularWeight)TheproteinhasapredictedMWof99.97kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto110-130kDabasedonSDS-PAGEresult.(Endotoxin)Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.純度(Purity)>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC.制劑(Formulation)Lyophilizedfrom0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).Normally8%trehaloseisaddedasprotectantbeforelyophilization.重構(gòu)方法(Reconstitution)Centrifugethetubebeforeopening.Reconstitutingtoaconcentrationmorethan100μg/mlisrecommended.Dissolvethelyophilizedproteinindistilledwater.儲存條件Theproductshouldbestoredat-25~-15℃for1yearfromdateofreceipt.2-7days,2~8°Cundersterileconditionsafterreconstitution.3-6months,-85~-65℃understerileconditionsafterreconstitution.CX3CL1用作粘附分子,,而兩種形式都是表達CX3CR1的靶細胞的化學吸引力。Somatostatin 28 (1-14)
在蛋白質(zhì)表達體系中,,腸激酶常用于切割融合標簽,,從而釋放出目的蛋白,特別是在pET表達系統(tǒng)中,。Recombinant Human FGF-17
抑肽酶(Aprotinin),,一種絲氨酸蛋白酶抑制劑,廣泛應用于生物技術(shù)領域,。本研究探討了利用大腸桿菌(E. coli)表達系統(tǒng)生產(chǎn)重組抑肽酶的方法,,及其在科研和工業(yè)生產(chǎn)中的優(yōu)勢。引言抑肽酶,,又稱胰蛋白酶抑制劑,,是一種小分子蛋白,能有效抑制胰蛋白酶,、糜蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的活性,。在生物制藥,、細胞培養(yǎng)和分子生物學研究中,抑肽酶的使用對于防止非特異性蛋白水解至關重要,。傳統(tǒng)的抑肽酶主要來源于動物,,如牛肺,但存在外源病毒污染的風險,。因此,,利用大腸桿菌表達系統(tǒng)進行重組抑肽酶的生產(chǎn),可以提供一種無動物源,、高純度,、質(zhì)量穩(wěn)定的替代品。材料與方法基因克隆與表達載體構(gòu)建:人源Ⅲ型膠原蛋白基因被克隆并構(gòu)建到適合大腸桿菌表達的質(zhì)粒載體中,。大腸桿菌表達菌株的構(gòu)建:通過轉(zhuǎn)化,,將構(gòu)建好的質(zhì)粒導入大腸桿菌宿主菌中,構(gòu)建表達菌株,。發(fā)酵培養(yǎng):利用發(fā)酵罐進行大腸桿菌的擴大培養(yǎng),,以提升重組抑肽酶的產(chǎn)量。蛋白純化:通過多次柱純化獲得高純度的重組抑肽酶,。Recombinant Human FGF-17