EndoS糖苷內(nèi)切酶在抗體藥物偶聯(lián)物（ADCs）的制備中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,。EndoS是一種特異性的內(nèi)切糖苷酶,，它能夠從IgG重鏈的N-糖基中切割N-連接的糖鏈。這種特異性使得EndoS在改造抗體的糖鏈結(jié)構(gòu)時(shí)非常有用,，尤其是在開(kāi)發(fā)定點(diǎn)ADCs時(shí),。在ADCs的制備過(guò)程中，EndoS的作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：1.**糖鏈切割**：EndoS能夠特異性地水解抗體Fc片段上的N-糖鏈,，為后續(xù)的糖鏈改造和藥物偶聯(lián)提供條件,。2.**糖鏈改造**：EndoS可以用于去除抗體上的原有糖鏈，然后通過(guò)酶的催化作用,，將特定的糖鏈結(jié)構(gòu)重新連接到抗體上,，實(shí)現(xiàn)糖鏈的定點(diǎn)修飾。3.**定點(diǎn)偶聯(lián)**：通過(guò)EndoS的催化作用,，可以將小分子細(xì)胞毒藥物通過(guò)特定的糖鏈結(jié)構(gòu)“一步”定點(diǎn)連接到抗體的糖基化位點(diǎn),，簡(jiǎn)化了ADCs的制備流程。4.**提高ADCs的均一性和穩(wěn)定性**：EndoS介導(dǎo)的定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)有助于獲得結(jié)構(gòu)均一性更好,、穩(wěn)定性更高的ADCs,，這對(duì)于提高藥物療效和減少副作用至關(guān)重要。5.**增強(qiáng)療效**：利用EndoS進(jìn)行的定點(diǎn)偶聯(lián)可以提高ADCs的體內(nèi)瘤抑制活性,，即使在低載藥量的情況下也能保持高效的抗瘤效果,。

重組人血清白蛋白（rHSA）是通過(guò)植物表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)產(chǎn)品,，在科研領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。以下是rHSA在科研中的一些主要應(yīng)用：1.**細(xì)胞培養(yǎng)**：rHSA是細(xì)胞培養(yǎng)中的重要成分,，它可以作為血清替代品,，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和維持細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性。由于其無(wú)動(dòng)物源成分,，可以減少血清中可能存在的病毒污染風(fēng)險(xiǎn),，適用于需要高生物安全性的細(xì)胞培養(yǎng)研究。2.**藥物載體**：rHSA因其良好的生物相容性和藥物結(jié)合能力,，被用作藥物載體,，有助于提高藥物的穩(wěn)定性、延長(zhǎng)藥物的半衰期,，并可能改善藥物的靶向性,。3.**疫苗保護(hù)劑**：在疫苗開(kāi)發(fā)中，rHSA可以用作保護(hù)劑,，有助于提高疫苗的穩(wěn)定性和有效性,。4.**細(xì)胞凍存保護(hù)劑**：rHSA在細(xì)胞凍存過(guò)程中起到保護(hù)作用，有助于提高細(xì)胞復(fù)蘇后的存活率,。5.**醫(yī)療器械包埋劑**：在醫(yī)療器械領(lǐng)域,，rHSA可以作為包埋劑，用于藥物洗脫支架或其他植入式醫(yī)療設(shè)備,。6.**生物制藥**：rHSA在生物制藥生產(chǎn)中作為穩(wěn)定劑和保護(hù)劑,，有助于提高蛋白質(zhì)藥物的穩(wěn)定性和療效。7.**基因**：在基因領(lǐng)域,，rHSA可能被用作基因載體,，幫助基因傳遞至目標(biāo)細(xì)胞。8.**化妝品添加劑**：在化妝品行業(yè),，rHSA可能因其保濕和修復(fù)特性而被用作添加劑,。Recombinant Cynomolgus IgE Protein,His-Avi Tag在CRISPR-Cas9等基因編輯技術(shù)中，使用Pfu DNA Polymerase進(jìn)行修復(fù)模板的合成,。

通過(guò)SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）和Westernblot（西方印跡）可以有效地檢測(cè)帶有His標(biāo)簽的泛素蛋白的純度和完整性,。以下是進(jìn)行這些檢測(cè)的步驟：###SDS-PAGE步驟：1.**樣品準(zhǔn)備**：-將重組泛素蛋白溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中，通常含有還原劑（如DTT或β-巰基乙醇）以斷裂二硫鍵,。-將樣品在95-100°C下加熱5分鐘以變性蛋白質(zhì),。2.**凝膠準(zhǔn)備**：-根據(jù)需要的分辨率選擇合適的凝膠濃度（例如，12%或15%凝膠用于檢測(cè)20-100kDa的蛋白質(zhì)）,。3.**上樣**：-將變性后的樣品加入到凝膠的相應(yīng)孔中,，同時(shí)加入分子量標(biāo)記物作為參照。4.**電泳**：-在恒定電壓或恒定電流下進(jìn)行電泳，直到樣品在凝膠中充分分離,。5.**染色**：-使用考馬斯亮藍(lán)或其他蛋白質(zhì)染色劑對(duì)凝膠進(jìn)行染色,，以可視化蛋白質(zhì)條帶。6.**分析**：-通過(guò)比較樣品條帶與分子量標(biāo)記物,，評(píng)估蛋白質(zhì)的分子量和純度,。###Westernblot步驟：1.**轉(zhuǎn)膜**：-將SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF或硝酸纖維素膜上。2.**封閉**：-使用封閉液（如5%脫脂奶粉或1%BSA溶液）封閉膜上未被蛋白占據(jù)的部分,，以減少非特異性結(jié)合,。3.**一抗孵育**：-使用特異性識(shí)別His標(biāo)簽的抗體（一抗）與膜上的蛋白質(zhì)孵育，通常在4°C過(guò)夜,。

EndoH糖苷內(nèi)切酶H在實(shí)驗(yàn)中的特異性和效率通常通過(guò)以下幾個(gè)方面來(lái)確定：1.**特異性識(shí)別**：EndoH能夠特異性地識(shí)別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈,，這些糖鏈通常存在于未成熟的糖蛋白中。2.**切割位點(diǎn)**：EndoH識(shí)別并切割殼二糖結(jié)構(gòu)中的β-1,4-糖苷鍵連接的甘露糖型結(jié)構(gòu)糖鏈,，但不能切割復(fù)雜型糖鏈糖蛋白,。3.**酶活性測(cè)試**：通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)糖蛋白底物進(jìn)行酶活性測(cè)試，可以確定EndoH的活性和效率,。4.**純化效果**：EndoH的純度可大于95%,，這有助于確保實(shí)驗(yàn)中酶的高效性。5.**比較分析**：與其他去糖基化酶（如PNGaseF）進(jìn)行比較分析,，可以評(píng)估EndoH的特異性和效率,。6.**應(yīng)用效果**：EndoH用于基于DNA測(cè)序的熒光輔助糖電泳(DSA-FACE)分析核糖核酸酶B(ribonucleaseB,RNaseB)的糖基結(jié)構(gòu)，可以比較不同酶的糖基切割功能,。7.**酶切時(shí)間**：EndoH的酶切時(shí)間通常為1-3小時(shí),，這有助于評(píng)估酶的效率。8.**產(chǎn)品信息**：通過(guò)查看產(chǎn)品信息,，包括產(chǎn)品編號(hào),、規(guī)格和目錄價(jià)，可以了解EndoH的商業(yè)可用性和應(yīng)用范圍,。通過(guò)這些方法,，研究人員可以確保EndoH在糖鏈分析中的特異性和效率，從而獲得準(zhǔn)確的糖鏈結(jié)構(gòu)信息,。多泛素化的靶蛋白被26S蛋白酶體識(shí)別,。26S蛋白酶體由一個(gè)20S顆粒和兩個(gè)19S調(diào)節(jié)顆粒組成。

酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F（PNGaseF）在實(shí)際應(yīng)用中具有以下優(yōu)勢(shì)：1.**高比活性**：具有高達(dá)750,000U/mL的比活性,，這表明該酶在催化反應(yīng)中具有很高的效率,。2.**快速反應(yīng)**：新型的FastPNGaseF能在數(shù)分鐘內(nèi)完成徹底且無(wú)偏好性的去糖基化，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,。3.適用性：PNGaseF可以用于天然或變性條件下的糖蛋白或糖多肽的去N-糖基化修飾,。4.**無(wú)其他糖苷酶活性**：該酶專(zhuān)一性高，無(wú)其他糖苷酶活性，確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。5.**His標(biāo)簽**：帶有His標(biāo)簽,，便于通過(guò)親和層析進(jìn)行純化和檢測(cè)。6.**穩(wěn)定性和儲(chǔ)存條件**：在含有50%甘油的儲(chǔ)存緩沖液中,，-15~-25℃保存,，有效期長(zhǎng)達(dá)1年。7.**簡(jiǎn)化的實(shí)驗(yàn)流程**：FastPNGaseF簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程,，減少了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，同時(shí)保持了靈敏度和重復(fù)性,。8.**兼容性好**：去糖基化后的產(chǎn)物可以直接用于下游的色譜或質(zhì)譜分析,，無(wú)需額外的純化步驟。9.**無(wú)偏好性**：能夠迅速且無(wú)偏好性地去除所有的N-糖鏈,，確保了獲得的糖鏈分布能夠表示抗體的正確組成,。在泛素化過(guò)程中，首先泛素激起酶E1（Uba1或其他）在ATP的存在下激起泛素分子,，形成E1-泛素硫酯中間體,。Recombinant Mouse B7-H5/Gi24/VISTA Protein,His Tag

Recombinant Biotinylated Human MAGE-A3 (HLA-A*24:02) Protein, His-Avi Tag 是一種通過(guò)重組DNA技術(shù)。Recombinant Cynomolgus DLL3 Protein,His Tag

酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F（PNGaseF）是一種酰胺水解酶,，具有以下特點(diǎn)：1.**高效性**：PNGaseF是去除幾乎所有N-連接寡糖從糖蛋白中有效的酶法方法,。它能夠在幾分鐘內(nèi)快速且無(wú)偏倚地釋放所有的N-糖鏈，適合后續(xù)的色譜或質(zhì)譜分析,。2.**重組酶**：該酶是重組的酰胺酶,，能夠從高甘露糖、雜合和復(fù)雜寡糖中切割內(nèi)GlcNAc和天冬氨酸殘基之間的連接,。3.**純度**：純度達(dá)到95%以上,，通過(guò)SDS-PAGE和完整ESI-MS進(jìn)行確定。4.**儲(chǔ)存穩(wěn)定性**：在含有50%甘油的儲(chǔ)存緩沖液中,，好的活性和穩(wěn)定性可維持長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月,。5.**使用條件**：可以在原生或變性條件下使用，對(duì)于變性條件下的去糖基化,，建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用,。6.**比活性**：具有高達(dá)100000U/mL的比活性。7.**His標(biāo)簽**：產(chǎn)品帶有His標(biāo)簽,，常用于抗體及其相關(guān)蛋白的完全去糖基化,。8.儲(chǔ)存條件：-25~-15℃保存，有效期1年,。9.**無(wú)甘油版本**：還提供了無(wú)甘油版本的PNGaseF,，這有助于在HPLC和質(zhì)譜分析中獲得結(jié)果。10.**酶活定義**：1個(gè)酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中，37℃條件下1小時(shí)從10μg變性RNaseB中除去超過(guò)95%的碳水化合物所需要的酶量,。這些特點(diǎn)使得酵母重組表達(dá)的PNGaseF成為研究和分析糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)的重要工具,。Recombinant Cynomolgus DLL3 Protein,His Tag