在比較BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶對于復(fù)雜DNA片段擴(kuò)增的適用性時(shí),以下是一些關(guān)鍵點(diǎn):1.**TaqDNA聚合酶**:-TaqDNA聚合酶因其高熱穩(wěn)定性和擴(kuò)增效率而被應(yīng)用于常規(guī)PCR。它擴(kuò)增速度為30-60秒/kb,缺乏3'→5'核酸外切酶活性,無校正功能,,易產(chǎn)生錯(cuò)配堿基,。-對于結(jié)構(gòu)復(fù)雜的模板,,如GC含量高,、有二級結(jié)構(gòu)等,TaqPlus可以用于擴(kuò)增,,能有效地?cái)U(kuò)增10kb以下的片段,。-有產(chǎn)品如TitaniumTaqDNA聚合酶,它是通過基因工程改造的Taq酶,,缺失了5'-3'外切酶活性,,具備更強(qiáng)大的擴(kuò)增性能,適合擴(kuò)增高度復(fù)雜的DNA混合物,。2.**BstDNA聚合酶**:-BstDNA聚合酶具有高適溫度,,能夠適應(yīng)更加苛刻的擴(kuò)增條件,同時(shí)消除DNA二級結(jié)構(gòu),,因而能夠準(zhǔn)確并且均勻地?cái)U(kuò)增全基因組序列,。-BstDNA聚合酶大片段能夠優(yōu)先擴(kuò)增短片段的DNA,并且能夠確保擴(kuò)增得到的DNA覆蓋了整個(gè)基因組,,連貫并且無偏地?cái)U(kuò)增所有的遺傳位點(diǎn),。-翌圣生物HieffCanace®PlusHigh-FidelityDNAPolymerase基于PfuDNA聚合酶改造而成,其保真性是Taq酶的83倍,,Pfu酶的9倍,,擴(kuò)增速度高達(dá)10秒/kb,擴(kuò)增目的片段長達(dá)13kb,,具有極強(qiáng)的擴(kuò)增效率的模板適應(yīng)性,,非常適合復(fù)雜模板的高保真擴(kuò)增。
一、產(chǎn)品特點(diǎn)(一)低 ROX 參考染料設(shè)計(jì)Probe qPCR Mix (2×, Low ROX) 專為基于探針的 qPCR 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),,其低濃度的 ROX 參考染料是其特點(diǎn),。在多色熒光 qPCR 實(shí)驗(yàn)中,,ROX 作為被動(dòng)參考染料用于校正孔間熒光信號的差異。然而,,過高的 ROX 濃度可能會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,,導(dǎo)致背景熒光過高或影響其他熒光信號的檢測靈敏度。該產(chǎn)品通過精確調(diào)控 ROX 濃度,,使其在保證校正功能的同時(shí),,降低對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾,為多色熒光檢測提供了穩(wěn)定可靠的背景環(huán)境,。(二)2×預(yù)混體系作為一款 2×濃度的預(yù)混液,,Probe qPCR Mix (2×, Low ROX) 在使用時(shí)只需與模板和引物等反應(yīng)組分等體積混合即可進(jìn)行反應(yīng),極大地簡化了實(shí)驗(yàn)操作流程,。這種預(yù)混體系不僅節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,,還減少了因手動(dòng)配制反應(yīng)體系而引入的誤差,提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性,。同時(shí),,其優(yōu)化的配方確保了反應(yīng)體系在不同實(shí)驗(yàn)條件下的穩(wěn)定性和兼容性,無論是對常規(guī)的基因表達(dá)分析,,還是對復(fù)雜樣本的病原體檢測,,都能提供可靠的性能保障。Recombinant Human CTACK/CCL27UBE2L3作為泛素化途徑中的關(guān)鍵酶,,其在蛋白質(zhì)降解,、信號傳導(dǎo)、細(xì)胞周期控制等重要內(nèi)容有著作用,。
ExoIII(ExonucleaseIII)和Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在DNA末端處理上的主要不同點(diǎn)如下:1.**作用方向**:-**ExoIII**:具有3'→5'外切脫氧核糖核酸酶活性,,它從DNA鏈的3'-OH末端逐步切去單核苷酸。-**Lambda核酸外切酶**:是一種5'→3'核酸外切酶,,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA,。2.**底物特異性**:-**ExoIII**:適底物是平末端或5'末端突出的DNA,但也可以作用于雙鏈DNA切刻位點(diǎn)產(chǎn)生單鏈缺口,。由于對單鏈DNA無活性,,因此難以切割3'突出末端。-**Lambda核酸外切酶**:適底物是5'磷酸化的雙鏈DNA,,對單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**活性差異**:-**ExoIII**:對具有3'-突出末端(至少有4個(gè)堿基,,且具有3'-末端C殘基)的DNA,、單鏈DNA、硫代磷酸酯連接的核苷酸無活性,。-**Lambda核酸外切酶**:對5'-OH端的切割速度比5'-P端慢約20倍,;對單鏈DNA的酶切速度比雙鏈DNA慢約100倍,。4.**應(yīng)用場景**:-**ExoIII**:可以用于生產(chǎn)特定方向的單鏈DNA,將線性化DNA設(shè)計(jì)成為一端為不切割末端(3'突出端),,另一端則設(shè)計(jì)為易切割末端(平端或5'突出端),。
dNTP/dUTPMixture(2.5mMeach/5mM):助力分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的高效防污染解決方案在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增和檢測的工具之一,。然而,,PCR產(chǎn)物的殘留污染可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果,嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性,。dNTP/dUTPMixture(2.5mMeach/5mM)作為一種高效的防污染試劑,,通過與尿嘧啶DNA糖苷酶(UDG)聯(lián)合使用,能夠有效解決這一問題,。產(chǎn)品特點(diǎn)高純度與穩(wěn)定性dNTP/dUTPMixture(2.5mMeach/5mM)采用高純度的dATP,、dCTP、dGTP和dUTP,,純度≥99%,,確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。該產(chǎn)品在-20℃下可穩(wěn)定保存24個(gè)月,,使用時(shí)需避免反復(fù)凍融。防污染機(jī)制該產(chǎn)品通過在PCR反應(yīng)中用dUTP替代dTTP,,使擴(kuò)增產(chǎn)物中摻入dU堿基,。隨后,UDG酶能夠特異性地降解含有dU的DNA產(chǎn)物,,從而有效去除殘留的PCR產(chǎn)物污染,。這種防污染系統(tǒng)特別適用于高通量PCR實(shí)驗(yàn)和需要嚴(yán)格控制假陽性的應(yīng)用場景。兼容性與適用性dNTP/dUTPMixture適用于多種DNA聚合酶,,如Taq酶和BstDNA聚合酶等,,可用于PCR、real-timePCR,、RT-PCR,、引物延伸反應(yīng)以及cDNA合成等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。然而,,需要注意的是,,某些具有校正活性的酶可能不適用于該混合物,具體需參考酶的產(chǎn)品說明書,。在對亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化后的DNA進(jìn)行擴(kuò)增時(shí),,Hot-Start Taq DNA Polymerase能夠提供高特異性和高靈敏度的擴(kuò)增效果。
核酸內(nèi)切酶VIII(EndonucleaseVIII)是一種來自大腸桿菌的DNA損傷修復(fù)酶,,具有以下特點(diǎn):1.**雙功能活性**:核酸內(nèi)切酶VIII具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性,。2.**釋放受損嘧啶堿基**:N-糖基化酶活性可以釋放雙鏈DNA上受損的嘧啶堿基,,如胸腺嘧啶乙二醇和尿嘧啶乙二醇,生成一個(gè)脫嘌呤(apurinic,AP)位點(diǎn),。3.**切割A(yù)P位點(diǎn)**:AP裂解酶活性可以切割A(yù)P位點(diǎn)的3'和5'端,,產(chǎn)生一個(gè)具有3'和5'磷酸的堿基缺口(Gap)。4.**識別并切除受損堿基**:核酸內(nèi)切酶VIII可以識別并切除多種受損堿基,,包括尿素,、5,6-二羥基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇,、5-羥基-5-甲內(nèi)酰脲,、尿嘧啶乙二醇、6-羥基-5,6-二氫胸腺嘧啶和甲基羥丙二酰脲,。5.**與EndonucleaseIII的區(qū)別**:雖然核酸內(nèi)切酶VIII與核酸內(nèi)切酶III相似,,但核酸內(nèi)切酶VIII具有β和δ裂解酶活性,而核酸內(nèi)切酶III具有β裂解酶活性,。6.**應(yīng)用領(lǐng)域**:核酸內(nèi)切酶VIII可以應(yīng)用于單細(xì)胞凝膠電泳,、NGS建庫中DNA損傷修復(fù)、酶法合成DNA中釋放DNA鏈,、堿洗脫,,搭配尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)進(jìn)行含U片段的克隆等。
Taq PCR Master Mix (2×)優(yōu)化了反應(yīng)體系,,能夠高效擴(kuò)增長達(dá)5 kb的DNA片段對于復(fù)雜模板也表現(xiàn)出良好的擴(kuò)增效果,。Recombinant Human DLL3 Domain (311-479) Protein,His-Avi Tag
Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性,。以下是關(guān)于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關(guān)鍵信息:來源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更強(qiáng)的5'-3' DNA聚合酶活性,、鏈置換活性和dUTP耐受性,適合用于抗污染的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),,如LAMP和CPA等,。應(yīng)用:主要應(yīng)用于等溫DNA擴(kuò)增,包括環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)和其他等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),。規(guī)格:活性定義:1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量,。溶液成分:包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl,、0.1 mmol/L EDTA,、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油,,pH 7.5 @ 25℃,。產(chǎn)品形式:提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),貨號14402ES,,以及凍干粉形式的產(chǎn)品,,貨號14405ES,不含甘油,。靈敏度和穩(wěn)定性:Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度,,低至5copies目的基因可測,且在飛克(fg)級別的模板量下也能快速達(dá)到閾值,。在37°C下,,該酶可以保持相對穩(wěn)定的效應(yīng)長達(dá)5天,并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年,。儲存條件:建議在-25℃至-15℃下儲存,,以保持產(chǎn)品活性,并避免反復(fù)凍融,。Recombinant Human DLL3 Domain (311-479) Protein,His-Avi Tag